ELISA操作真的很简单吗？一文细说

  酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种常见的免疫实验技术。科研工作者可以用它来检测样本中特定抗原或抗体。ELISA基本原理相对简单，但是整个实验涉及多个步骤，以确保实验结果的准确性和可靠性。以下是ELISA实验步骤：

图1 ELISA实验步骤（图片来源网络）

  1.样本准备。需要准备好待检测的样本，这些样本包括血清、血浆、细胞培养上清液等。样本的收集和保存要符合实验的要求。相关阅读：《酶联免疫吸附实验：ELISA样本处理、收集和保存》

  2.加样。将样本和对照品加入到ELISA板指定的孔中。这一步确保加样准确性和一致性。

  3.孵育。加样之后，需要将ELISA板放入指定的温度（37度）下进行孵育，让抗原和抗体与固定的板上的抗体或抗原结合。

  4.洗涤。孵育之后，需要通过洗涤去除未结合的成分，以减少非特异性背景信号。这一步要确保洗涤的彻底性和一致性。

  5.酶标抗体孵育。在洗涤之后，需要加入酶标抗体（通常是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的抗体），结合已结合的抗原和抗体。然后再次进行孵育和洗涤操作。

  6.底物反应。加入底物溶液，酶会催化底物发生反应。颜色的深浅和样本中目标物质的含量成正比。

  7.读取结果。通过酶标仪读取ELISA板各孔的光密度（OD）值，计算出样本目标物质含量。

  从上述步骤可以看得出ELISA操作步骤看似简单，但是每个步骤细节要严格的把控，任何一个环节的失败都可能导致结果的偏差或错误。对于初学者，通蔚建议有经验的实验人员指导下进行。