一文盘点细胞培养过程中细胞计数常见四种方法

  细胞培养技术是生命科学研究中不可或缺的工具，而准确的细胞计数则是确保实验结果可靠性和可重复性的关键步骤之一。细胞数量的准确测定对于后续实验，例如药物筛选、转染实验、细胞功能分析等至关重要，否则可能导致实验结果的偏差甚至失败！本文将介绍几种常见的细胞计数方法，并比较它们的优缺点。

  细胞计数方法

  目前细胞计数方法较多，在实验室常见的技术方法有以下几种：

  血细胞计数板法

  原理：利用血细胞计数板上的计数室，在显微镜下直接对细胞进行计数。计数室有固定的容积，通过计算一定容积内的细胞数量，进而推算出细胞悬液的细胞浓度。

  操作：将细胞悬液充分混匀后，取适量滴加到血细胞计数板的计数室上，使其自然流入，避免产生气泡。在显微镜下，按照一定的顺序对计数室内的细胞进行计数，根据计数公式计算细胞浓度。

  特点：操作简单、成本低，可直接观察细胞形态，但对于细胞悬液中细胞密度过低或过高时，计数误差较大，且主观性较强。

  台盼蓝染色法

  原理：活细胞的细胞膜具有选择透过性，台盼蓝不能进入活细胞，而死细胞的细胞膜丧失了选择透过性，可被台盼蓝染成蓝色。通过显微镜下分别计数活细胞和死细胞的数量，可计算出细胞的存活率和细胞总数。

  操作：将细胞悬液与适量的台盼蓝染液混合，室温下孵育一定时间后，取混合液滴加到血细胞计数板上，在显微镜下计数。

  特点：能区分活细胞和死细胞，可同时进行细胞计数和活力检测，但对于一些细胞膜受损但仍具有代谢活性的细胞，可能会出现误判。

  电子细胞计数器法

  原理：当细胞悬液通过一个小孔时，细胞会引起小孔内电阻的变化，从而产生一个电脉冲信号，电子细胞计数器可对这些电脉冲信号进行计数和分析，进而得到细胞的数量和大小分布等信息。

  操作：将细胞悬液加入到电子细胞计数器的样品池中，设置好相关参数后，启动仪器进行计数。

  特点：操作简便、快速，计数准确，可同时得到多个细胞参数，但仪器价格较高，对细胞悬液的要求较高，细胞团块或杂质可能会影响计数结果。

  流式细胞术

  原理：将细胞制成单细胞悬液，使其在鞘液的包裹下，逐个通过流式细胞仪的检测区域。细胞通过激光照射时，会产生散射光和荧光信号，这些信号被光电探测器接收并转化为电信号，由计算机进行分析和处理，从而得到细胞的数量、大小、荧光强度等信息。

  操作：先对细胞进行荧光标记等处理，然后将细胞悬液注入流式细胞仪，设置好检测参数和分析门限等，即可得到细胞计数及相关分析结果。

  特点：可同时对多个参数进行分析，能准确区分不同类型的细胞，对细胞的活性和功能等也能进行检测，但仪器昂贵，操作需要专业人员，且检测成本较高。

  上述是细胞培养过程中细胞几种技术方法，大家可以结合上述每种方法特点来选择合适的方法，为后续实验，例如药物筛选、转染实验、细胞功能分析等提供可靠的结果！随着技术的不断发展，相信未来会出现更加便捷、精确的细胞计数方法，为生命科学研究提供更强有力的支持。