发布时间:2024-10-09 发布作者:上海通蔚生物
ELISA是实验室里一项最基本的免疫检测技术,被广泛应用科研、医疗、食品和环境等领域。面对市场琳琅满目试剂盒及数百家供应商,对于刚进入实验室的新手或者准备开展ELISA实验人员,如何选择一款合适的ELISA试剂盒呢?下面我们从elisa类型、实验物种及待检样品、样品中检测物水平、样本可获得性、试剂盒关键性技术参数和预算。
目录:
1.ELISA类型
3.样品中检测物水平
4.样本可获得性
6.预算
在进行ELISA实验时,首要是明确ELISA类型。实验人员可以结合自己待检测物来明确试剂盒类型。一般试剂盒类型分为直接法、间接法、竞争法和双抗体夹心法。下面详细介绍:
1.直接法:直接ELISA步骤最少,常用于分析对抗原的免疫反应。
2.间接法:间接ELISA是一个两步过程,最适合确定样本中的总抗体浓度。
3.夹心ELISA(适用于大蛋白)利用匹配的抗体对,灵敏度比间接或直接ELISA高2-5倍。用于分析复杂样品,因为抗原在测量前不需要纯化。
4.竞争性ELISA(适用于小蛋白质)最适合检测不能被两种不同抗体结合的小抗原,例如夹心ELISA技术。
如果实验对象是人、小鼠及大鼠比较常见物种,选择一个合适的试剂盒相对容易一些。如果检测样品比较稀有的鸡、牛、猴物种,市面上还是比较少。如果需要的话,最好要对待检物(如有种属差异性)进行同源性分析以及试剂盒的种属交叉反应数据。
对于样品类型而言,一般的商业化试剂盒在正式上市销售之前都经过血清、血浆和细胞培养上清液的验证。
在选择试剂盒之前,最好是详细阅读说明书。因为在某些情况下样品会存在感染因素。例如溶血血浆、含有高脂肪的样本、细胞培养液或人抗属抗体中含有胎牛血清等。通过阅读供应商说明书或直接进行咨询。如果您的样品为组织和细胞裂解物,则需要谨慎的选择试剂盒。
为了降低目标蛋白之外的其他成分(例如盐离子、脂类、其他蛋白质等),一般建议至少进行2倍稀释,也就是将1份样品与1份稀释液混合。如果对样品浓度范围没有概念,最好先做预实验,测试不同稀释倍数下的结果,找到最佳稀释倍数。除此之外,样品中待检测物含量远超试剂盒检测范围(标曲范围),需要根据样品中目标蛋白的大概浓度和试剂盒的检测范围,选择合适的稀释倍数。最后计算结果时,需要将测得的数值乘以相应的稀释倍数,才能得到样品中目标蛋白的真实浓度。
一般而言,商业化试剂盒的样本用量都在50ul或100ul,但也有一些供应商的试剂盒样品用量要求可少至于10ul。如果您待检测样品比较难获取,则需认证考虑试剂盒对样品用量的需求。如果样品本身就比较少,且需要做多因子检测时更需要谨慎选择。
ELISA试剂盒关键的技术参数包括板内差异性、板间差异性、批间差异性、重复性、特异性及交叉反应性、回收率等。如果经常开展ELISA实验,建议使用同一厂家试剂盒,这样可以保证实验数据的可比性和重复性。
预算是选购ELISA试剂盒比较关键的环节。国际公认知名品牌(进口试剂盒)质量比较可靠,文献引用较多。由于知名品牌(进口)运输成本较高,试剂盒价格也较高。对于国内优质品牌试剂盒也是不错的选择,因因省去不少物流和报关中间费用,与进口试剂盒价格上相比也有较大的优惠,而且能够提供灵活的包装规格,比较适合国情。
以上就是通蔚为大家介绍ELISA试剂盒选择方法,广大科研人员选择试剂盒务必仔细研究,谨慎购买。如果您对ELISA试剂盒还有疑问,欢迎前来咨询通蔚试剂盒顾问。