免疫测定试剂盒概述及其工作原理

  40多年来，免疫测定法一直应用于医疗保健行业、实验室医学和科学研究，丰富了人类和动物的生活。临床免疫测定测试增强了治疗选择，减少了患者住院时间并减轻了疾病的严重程度。

  在生命科学领域，免疫测定通过监测各种蛋白质、激素和抗体在研究生物系统方面发挥着至关重要的作用。在商业领域，免疫测定有多种用途，包括检测食品和水中的毒素以及对制造过程中使用的特定分子进行质量控制监测。

  在商业领域，免疫测定测试用于各种目的，包括检测食品和水中的毒素以及制造过程中使用的特定分子的质量控制监测。

  本文上海通蔚生物将为大家介绍免疫测定试剂盒的各个方面、其工作原理及其用途。

  什么是免疫测定？

  免疫测定是一种分子检测测试，由于其速度快、可靠性高，因此既可用于现场，也可用于实验室。免疫测定依赖于抗体与分子独特结构结合的天然能力，以确保准确性。因此，它们对于定制抗体生产服务很有价值。动物在检测到病原体存在时就会产生抗体和蛋白质。抗体可能存在于体液中，包括血液和组织液，它们可以在与抗原接触时与抗原结合。

  抗体之所以特殊，是因为它们只与目标抗原或分析物结合，这是通过根据抗原的三维框架定制定制抗体来实现的。一旦从人体血液中分离出来，纯单克隆和多克隆抗体就可以作为高精度测试试剂，用于监测目标分子，同时最大限度地减少周围化合物和化学物质的干扰。

  免疫测定测试的工作原理

  抗体可用于免疫测定测试，以识别血液和其他体液中低浓度的生物标志物。这种方法使抗原与新引入的特定抗体结合，产生免疫反应。这指的是选择性；抗体的目标范围很窄，只与目标分析物结合。免疫测定可以利用抗原和抗体之间的相互作用，用清洁试剂检测分析物。当目标分析物存在时，就会发生颜色变化。所见的颜色代表测试液中目标化学物质的浓度。

  免疫测定类型

  1.蛋白质印迹法(WB)

  通过电泳根据给定生物样本中的蛋白质大小进行分离，然后将其转移到膜上并用特定抗体染色。利用该技术，除了检测感兴趣的蛋白质外，还可以确定其大小、确认是否存在翻译后修饰或比较不同样本中的浓度等。

  2.免疫沉淀(IP)

  通过抗原-抗体复合物的沉淀从样品中存在的其他成分中分离出某种蛋白质。除了检测和定量蛋白质外，其应用非常广泛，包括确定某种抗原的分子量、研究蛋白质之间的相互作用或监测翻译后修饰。

  3.放射免疫分析（RIA）

  使用放射性同位素标记抗原抗体复合物。随后，读取放射性来检测复合物并确认和量化样本中目标蛋白质的存在。放射免疫分析法的优点之一是它是一种高灵敏度的技术，可以检测出样品中浓度极低的蛋白质。然而，它也有一个很大的缺点，那就是使用放射性物质存在潜在的危险。

  4.ELISA（酶联免疫吸附测定）

  在不同类型的免疫测定中，ELISA因其易于实施、多功能性以及高灵敏度和特异性而成为研究实验室中最流行和最常用的方法之一。它基于酶的使用，通过添加相应的底物催化比色反应，可以检测抗原-抗体连接（从而检测样品中是否存在某种抗原）。

  5.CLIA(化学发光免疫分析)

  化学发光测定或CLIA与ELISA的原理相同，不同之处在于，在这种情况下，抗原-抗体结合是通过化学反应产生的荧光来测量的。CLIA检测的缺点是需要特定的设备来读取荧光，但另一方面，它们的优点是灵敏度明显高于传统的ELISA。

  6.免疫荧光（IF）

  在免疫荧光测定中，利用荧光团可以通过与特定抗体的结合来检测目的抗原。

  7.免疫组织化学(IHC)

  结合了免疫学、生物化学和组织学技术，通过使用特异性抗体来检测组织切片中存在的抗原。此外，它还可以可视化所研究组织内抗原的分布和位置。

  8.免疫细胞化学（ICC）

  这是一种与免疫组织化学具有相似基础的技术，只是在这种情况下，免疫细胞化学可以检测细胞内的抗原。IHC和ICC的灵敏度略低于ELISA或WesternBlot，但它们允许在完整细胞或组织的背景下研究抗原，而无需事先将其分离。

  9.流式细胞术（FC）

  在各种免疫测定方法中，流式细胞术是最复杂的方法之一。流式细胞术是一种测量激光光束散射和反射的方法，根据细胞的物理化学特性对悬浮液中的细胞进行计数和分析。

  免疫测定有哪些应用？

  免疫测定法因其操作简单而广为使用。以下是免疫测定法的一些常见应用。

  1.临床诊断和用药监督

  免疫测定在多种疾病的诊断和治疗中发挥着重要作用。免疫测定用于癌症诊断、妊娠检测和治疗药物监测，以及定制肽合成等其他应用。这些生物分析测定可以评估用于治疗癌症和艾滋病毒的处方药的疗效。此外，它们还用于工作场所的药物检测领域。

  2.生物制药分析

  “生物制药”是指使用生物过程或材料衍生、生产或创造的药物和生物试剂。免疫测定是生物制药研究和开发的有益工具，例如细胞疗法、基因合成和疫苗。

  3.食品分析

  在生产食品和开发新食谱时，免疫测定测试经常用于识别潜在的有害污染物或过敏原。例如，免疫测定测试可以筛查麸质、危险化合物、重金属中毒或大肠杆菌等病原体。

  4.食物过敏原检测

  这种检测至关重要，因为食物引起的过敏反应可能是致命的。有些人的免疫系统对某些食物中的蛋白质反应异常，导致一种称为食物过敏的疾病。涉及免疫球蛋白的细胞介导和抗体介导反应都会引起症状。牛奶、鸡蛋、杏仁、芝麻、小麦和甲壳类动物是常见的过敏食物，可以使用家庭和工作场所提供的众多免疫测定试剂盒之一进行检测。

  从生产设备中取出的拭子和对成品食品的测试可用于确定是否存在交叉污染，并确保企业遵守法律法规。食物过敏者可以提供人类IgE进行免疫学测试，而多克隆或单克隆动物抗血清可以提供动物IgG和IgY。虽然单克隆抗体被设计成仅识别一种蛋白质或肽，但多克隆抗血清是针对一组蛋白质产生的。

  点免疫印迹法或SDS-PAGE可用于定性鉴定食物过敏原，而Rocket免疫电泳法和ELISA可用于定量鉴定隐藏的食物过敏原。点免疫印迹法也是一种定性检测食物过敏原的方法。ELISA用于鉴定完整的蛋白质，但某些ELISA无法检测蛋白质水解物。由于亲脂性残留物很难定位，因此被称为免疫测定ELISA的残留检测方法需要进行重大开发。

  5.霉菌毒素分析

  霉菌毒素是天然存在的毒素，由特定霉菌产生。它们对人类健康有害，对消费者构成威胁。黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和伏马毒素等毒素都属于此类有害物质。

  如果储存不当，玉米、小麦、大米、燕麦、黑麦、大豆、坚果、水果和香料等农产品都可能被霉菌毒素污染。此外，霉菌毒素在收获和干燥之前可能会进入食品和饲料中。基于免疫测定技术的霉菌毒素检测技术问世已有十多年。直接竞争性ELISA测试是检测霉菌毒素最流行的免疫测定程序。

  6.环境监测

  近年来，免疫测定法已进入环境科学领域。免疫测定法有助于检测环境污染物。例如，免疫测定法可检测地下水和地表水中的各种有害物质，如PCB（多氯联苯）、某些杀虫剂等。

  免疫测定测试有哪些优势？

  由于其实用性，抗体免疫测定已变得很普遍。使用抗体或免疫测定的方法包括：

  1.经济

  2.可靠的

  2.足够灵敏，可以检测到微量分子

  4.适用于多种化学工艺和工业用途

  免疫测定可以识别常规程序无法检测到的低浓度重要抗原。免疫测定通常快速而精确，使临床医生能够可靠地诊断各种疾病，包括糖尿病、癌症和心血管疾病。