ELISA 抗体：概述与应用

  酶联免疫吸附测定(ELISA) 抗体是用于研究蛋白质的 ELISA 测定的关键要素。在继续了解抗体作用之前，有必要了解有关 ELISA 测试的更多信息。

  ELISA 是实验室最常用的检测方法之一，用于检测和定量分析可溶性物质，例如肽、抗体和激素。它也称为酶免疫分析 (EIA)。

  ELISA 测定的工作原理是特异性抗体和抗原相互作用。它包括将抗原固定在固体表面上，然后将其与附着在报告酶上的抗体复合。然后，使用不同的检测方法，通过与适当的底物一起孵育来测量报告酶活性。

  然而，如今已经开发出不同类型或形式的 ELISA 检测，其中包括：

  1、直接ELISA

  2、间接ELISA

  3、夹心ELISA

  4、竞争性ELISA

  但是，它们都遵循相同的基本步骤，包括：

  1、添加捕获抗体：将吸附的捕获抗体（与 ELISA 板结合）和含有特定抗原的样品添加到孔板中。

  2、清洗步骤：清洗微孔板孔以去除未结合的物质，仅留下要检测的抗原。

  3、添加检测抗体：酶联检测抗体与目标抗原的不同表位结合。

  4、清洗步骤：再次清洗微孔板以去除未结合的抗体。

  5、检测：涉及使用合适的检测方法（例如化学发光、显色、比色和荧光测定）对复合物进行可视化。辣根过氧化物酶 (HRP) 和碱性磷酸酶 (ALP) 是两种最常用的底物，它们与酶结合以产生信号。  

  6、读板：酶标仪检测有色反应产物并计算光密度 (OD) 值，从而了解每个样本中存在的抗原量。

  ELISA 反应的分析之所以成为可能，主要是因为抗原和抗体之间的强力相互作用。并且，本文上海通蔚生物详细介绍了 ELISA 抗体、其功能、在 ELISA 方法中的作用以及在工业中的应用。

  ELISA 抗体：它们是什么及其类型？

  ELISA 抗体抗体与特定抗原配对，有利于研究不同样品中分子的特定蛋白质。

  根据定义，抗体是为生物体提供针对细菌和病毒（称为抗原）等外来入侵者的免疫力的蛋白质。抗体也称为免疫球蛋白 (Ig)。

  抗体的四种多肽各有两条轻链和两条重链。在 ELISA 中，抗体根据是否直接结合抗原或另一种抗体进行分类：

• 一抗：与目标抗原特异性结合的抗体

• 二抗：标记的二抗与一抗结合

  这些抗体也称为匹配抗体对。为了减少 ELISA 反应过程中的背景噪音并产生有效的结果，建议使用抗体的稀释液。

  如今，许多公司提供即用型 ELISA 试剂盒，其中包含合适的试剂，用于检测各种分子，如趋化因子、细胞因子和生长因子。

  一抗

  一抗直接与固定在孔板表面的特定抗原结合。

  为了产生一抗，需要一种宿主物种，例如兔子、小鼠、山羊或鸡。在生产的第一步中，宿主将针对抗原进行免疫，产生一抗。

  二抗

  二抗与抗体-靶蛋白复合物结合。它通常带有标记，有助于检测目标抗原。具体来说，这种类型的测定对于通过信号放大分析少量存在的特定蛋白质的数量至关重要。

  通过将一抗注射到另一种宿主中来产生二抗。例如，如果一抗是在小鼠中产生的，则二抗可以在山羊、兔子或鸡中产生。

图：一抗和二抗的表示

  一抗和二抗都可以是单克隆抗体或多克隆抗体。

  单克隆抗体

  单克隆抗体是由单一亲本细胞中产生的相同 B 细胞克隆产生的同质抗体群。它仅与特定抗原的单个特定表位相互作用。

  图：单克隆抗体的生成。

  多克隆抗体

  多克隆抗体是体内不同 B 细胞克隆产生的异质抗体群。它们可以识别并结合单一抗原上的多种表位。

  图：多克隆抗体的生成

  抗体如何与免疫测定一起使用？

  免疫测定是生命科学实验室中使用的强大技术，用于研究蛋白质、测量给定样品中蛋白质的含量，并分析蛋白质在生物体中的功能和定位。它们的工作原理是特异性抗原-抗体相互作用。

  检测抗原抗体相互作用的两种免疫测定包括：

• 直接免疫测定：在该测定中，酶联一抗与靶抗原结合。这种抗原-抗体相互作用激活信号分子进行检测。

• 间接免疫测定：一抗与靶抗原结合。然后，酶缀合的二抗与一抗结合以检测相互作用。通常，该反应还使用生物素-链霉亲和素复合物来放大信号。

  ELISA 抗体有什么用途？

  ELISA 抗体在免疫学和生命科学实验室中有广泛用途。下面列出了一些应用：

• 一抗可用于检测许多疾病的疾病生物标志物，例如糖尿病、癌症、阿尔茨海默病和帕金森病。然而，为了确认诊断并识别假阳性，研究人员需要进行蛋白质印迹分析。

  此外，一抗还应用于多种治疗剂的分布、代谢、吸收和排泄。  

• 二抗在一系列工作流程中具有深远的用途，包括 ELISA、蛋白质印迹、免疫组织化学、免疫染色和免疫细胞化学。