抗体是多种免疫测定技术必不可少的工具。然而，为了使抗体产生可靠的数据，它们应该对目标物种和应用中的目标分析物具有经过证实的特异性。
抗体是不可或缺的研究试剂
抗体具有在存在许多其他生物分子的情况下识别和结合目标分析物的独特能力，是科学研究不可或缺的工具。根据其应用，抗体可以提供靶标量化，识别细胞和组织中蛋白质表达的空间和时间模式，甚至监测结合事件以确定生物相互作用如何影响细胞行为。虽然传统的多克隆抗体和单克隆抗体在研究人员中仍然很受欢迎，但重组抗体的使用率有所提高，因为它们具有出色的批次间一致性，并且相对容易被设计成不同的形式。此外，抗体片段和合成免疫试剂（如适体和非免疫球蛋白支架）正被研究人员越来越广泛地使用。
抗体被归咎为可重复性危机的根源
近年来，用于科学研究的抗体试剂的质量受到质疑。2008年的一篇《分子与细胞蛋白质组学》出版物报道称，在独立测试中，只有49%的商业抗体能够准确检测到其蛋白质靶标，而2015年的一篇开创性《自然》文章则指出抗体是造成可重复性危机的主要因素——人们越来越意识到许多科学实验的结果无法重复(1,2)。考虑到实验经常基于其他实验室的工作设计，因此由于抗体性能不稳定、不必要的交叉反应或用于错误的应用等因素而导致的不可重复性是一个严重的问题。这导致制造商验证抗体的方式以及选择用于研究的产品的方式发生了转变。
抗体验证的五大支柱有望提高可重复性
为了解决可重复性危机，由瑞典皇家理工学院MathiasUhlen领导的研究小组于2016年召集了一个特设的抗体验证国际工作组(IWGAV)，以定义验证常见研究应用中使用的抗体的最佳实践。值得注意的是，IGFAW建议抗体验证遵循以下五大支柱，并建议至少将其中之一纳入抗体测试流程，以支持特定应用的验证要求 。
1.遗传策略
遗传策略涉及比较表达靶蛋白的样本与靶蛋白表达已被基因组编辑或RNA干扰消除或显著降低的样本之间的抗体结合活性。敲除(KO)细胞系通常用于此类研究。
2.正交策略
正交验证是将基于抗体的目标检测与不依赖抗体的方法进行比较的过程。后者的例子包括质谱(MS)、转录组学和原位杂交。
3.独立抗体策略
独立抗体策略直接将正在评估的抗体与针对同一靶标进行验证的另一种抗体进行比较。对于这种类型的验证，两种抗体具有不重叠表位至关重要。
4.标记蛋白的表达
使用融合标签表达目标蛋白可以将抗体信号与标签特异性抗体的信号进行比较。这种方法的局限性在于，加入标签可能会改变目标蛋白的特性。
应用抗体验证原则
抗体验证的五大支柱受到了科学界的热烈欢迎。许多抗体制造商已将这些支柱纳入其现有的验证流程，而研究人员也越来越倾向于寻找已进行此类测试的证据。选择抗体时，建议您查看产品数据表，以获取实验证明该抗体适用于您选择的物种、样品类型和应用。您的购买决定还可能受到有关抗体的其他信息的指导，例如用于抗体生产的免疫原、同种型和缓冲液配方的详细信息，以及用于验证目的的方案。至关重要的是，在使用您选择的抗体试剂时，您应该始终在每次进行的实验中包含阳性和阴性对照。
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