三分钟带您理解PCR - 聚合酶链式反应

  什么是PCR？PCR也叫聚合酶链式反应，是一项在体外迅速扩增DNA片断的技术。它能够以及少量DNA为模版，在几小时内扩增出上百万份DNA拷贝。PCR可以用于表达载体的构，如基因重组，病原体检测和基因检测。

  为了获得庞大的拷贝量，PCR一般需要经历三十多轮循环，在每轮循环过程中，都需要经历变性、复性和延伸三个步骤。每个步骤分别需要温控、DNA母链、20至30个核苷酸长度的引物、耐高温的DNA聚合酶以及四种脱氧核酸苷酸ATCG。

  这5大要素中，首先是变性阶段。当温度上升到90度时，双链DNA解聚为单链，温度下降到50度左右时，进入复兴阶段。

  我们需要使用两种引物，通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，此时需要大家提前留意各个单链以及引物的方向。

  以 5' 到 3' 是DNA复制始终遵循的正方向，3' 至 5' 是DNA单链。与3' 至 5'的引物想结合，也称正向引物，反之， 5' 到 3' 是DNA单链与3' 至 5'引物想结合，称反向引物。

  最后延伸开始，温度上升到七十二度左右时，耐高温的Taq酶，就四种脱氧核酸苷酸添加引物的 3'端。

  在PCR中，引物之所以称之为引物，是因为它规定和引导了复制开始的方向，也就是说，DNA每次的复制都必须从引物的 3'端开始，沿着引物自身 5' 到 3'的方向进行延伸。有趣的是引物模版中间的某个部位开始引导复制，所以在第一轮结束时，一对新产生的DNA双链中，存在不同长度的单链。至此，本轮翻译结束。

  接下来第一轮循环的产物作为第二轮反应的模版在经过之前的三个步骤产生第二轮循环的产物。

同样的，DNA依然能够从引物的3'端开始复制，又形成了新的不同长度的单链。我们发现进入第三轮反应后，在前两次正向、反向引物的夹击复制下，第一次形成了两队等长的短双链DNA，既两端仅带引物序列的目的基因片段。接下来，依据DNA半保留复制的原则，这样的短双链DNA呈指数扩增。

上述是PCR扩增原理的说明，大家仅供参考！具体大家可以在实验中去理解每个步骤原理的情况。

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