细胞培养失败？别慌！这些原因和处理方法你都知道吗？

  在实验室里，没有什么比细胞无法生长或细胞培养物无法附着更令人抓狂的了。细胞生长受阻和培养行为不稳定会延误项目、让团队感到沮丧，并使科研人员疑惑到底出了什么问题以及如何解决。

  这些问题的解决方案并不总是那么简单。细胞培养很复杂，需要花时间来分析过程并找出问题。通常，最常见的问题包括异常生长模式或细胞附着不均匀或不一致。其他问题包括生长速度缓慢或突然变化或无法解释的结果。

  这些问题往往与培养技术、孵化和培养基有关。跟随上海通蔚生物一起探讨一下这些痛点，以及如何通过良好的做法预防它们的影响。

  什么原因导致细胞培养失败？如何处理？

培养技术

  细胞培养是一个复杂的过程，任何步骤的失误都可能导致培养失败。当细胞培养出现问题时，首先要评估的是处理技术，因为处理不当是导致失败的常见原因。下面通蔚生物为大家盘点几种细胞培养技术中比较常见的原因：

  细胞接种物处理不均匀或混合不充分会产生泡沫，从而阻碍细胞生长和附着，并在容器上留下斑点。使用无菌吸管或移液器轻轻混匀细胞悬液，确保细胞均匀分布在培养容器中。避免过度混合，以免产生泡沫。

  静电会破坏塑料容器中的细胞附着，尤其是在干燥环境。打开容器时，尽量不要让容器与包装摩擦。擦拭容器外部或使用防静电设备也可以阻止静电。

  细胞接种量不足会导致容器壁上细胞生长过快。根据细胞类型和培养面积选择合适的接种量。观察细胞生长情况，及时调整接种量。

  滚轮瓶的旋转速度可能会导致大量生长或结块。将起始速度设置为每分钟半转至每分钟一转之间，并根据需要进行调整。保持滚轮清洁，以防止打滑或失速。

  定期观察细胞生长情况，注意细胞形态、密度、生长速度等变化。通常可以判断出出现了问题。为了最好地检测这些问题，使用戊二醛或乙醇固定样本培养物，然后在观察前对其进行染色。除了上述培养技术中几个问题，下面为大家也列出关于孵化和细胞培养基问题。

  孵化问题

  尽管使用培养箱的目的是尽量减少温度变化等环境因素，但许多变量仍然会影响生长速度和培养活力：

  在实验过程中反复打开培养箱会导致温度变化；容器的堆放方式和位置也会导致温度变化。除非迫不得已，否则不要打开培养箱，并将关键培养物放在后面。还要考虑堆放培养皿的位置效应；最下面的培养皿最靠近金属架，因此加热速度更快。

  蒸发影响细胞生长速度和模式；保持水箱充满水并使用气体洗涤缸加湿进入的气体可最大限度地减少蒸发。

  振动会导致细胞生长异常，例如形成同心细胞环。振动可能来自孵化器中松动的风扇马达，也可能来自其他任何来源，例如人流或电动设备。将孵化器放置在坚固的表面上，且没有其他会振动的设备。

  其他环境预防措施，如保持孵化器水平且不含有毒杂质，对于正常生长也至关重要。

  细胞培养基问题

  培养基缺陷并不总是可见的，许多因素（例如试剂质量不足、缓冲液和过滤，甚至荧光毒性）都会影响培养基的功能。

  除了确保你使用正确的配方进行研究并购买高质量的用品外，测试培养基功能的最佳方法是进行实验。将有问题的培养基与其他制造商的相同培养基进行比较。如果新培养基产生相同的结果，则可能是技术或孵化方面的问题。

  上述为大家罗列出细胞培养过程经常遇到的一些问题，大家如果遇到细胞培养问题，可以逐一的去找到对应原因进行解决问题。如果对细胞培养还有什么疑问，欢迎前来咨询通蔚生物，通蔚生物有多年的细胞培养经验，包括代测服务。同时也祝您今后细胞培养更上一层楼。