10分钟带您认识“elisa检测试剂盒？”

  ELISA中文全称“酶联免疫分析”。ELISA试剂盒用途非常广泛，比如常见的医学临床诊断，我们近年来常见的艾滋病、非典、新冠等病毒发挥着巨大的作用。不仅如此，常规的血检、尿检、药检和过敏原检测都是ELISA强项。今天，带大家认识一下什么是ELISA检测试剂盒。

  ELISA在1971年被Engvall和Perlmann发明，是一种利于酶联免疫法来定量检测液体样品中目标物质浓度的生物化学方法。

  抗原反应

  B细胞在获得性免疫过程中，活化的B细胞会成为浆细胞和记忆B细胞，而浆细胞则会产出“Y”形的抗体蛋白来与异物抗原进行特异性的结合，起到标记和消灭抗原的目的。

  对于抗体抗原反应的准确描述要到1950年（代）才被Wisconsion大学的Goldberg提出随着人们认识到抗原和抗体的结合就像钥匙与锁一样具有特异性。免疫法开始成为生物化学和医学界的一种检测手段。

  抗体产生

  科学家把需要检测的特殊抗原注射到动物体内，让动物的免疫系统产生抗体，然后把动物产生的抗体收集起来，就可以对未知样品中的抗原进行检测。在酶联免疫发明之前，科学家和医生有两种方式来使用免疫法

  1.免疫沉淀。一种是在特定的溶液中让抗原和抗体结合产生免疫沉淀。

  2.放射性免疫标记。另一种是使用放射性的抗原和抗体进行放射性的免疫标记。这两种方法的局限性非常明显。

  缺点：第一种只能定性而不能定量，第二种则对人体有显著的危害！

  1960年代后期，酶被应用到免疫测定方法。使用酶来代替放射性的方法被开发出来。使的的免疫测定不再对人体产生危害!1971年ELISA正式问世，就因为它简单小巧而又准确，立刻成为主流。

ELISA试剂盒

  今天我们接触到的ELISA已经得到了大幅度的优化，甚至改变一些重要的技术原理，人们依然把这些方法称为ELISA，也是对这个极其巧妙的生化检测方法一种敬仰。

  如果评选一种最简单、应用最广泛、结果最准确，并且价格最亲们的生化检测方法，一定会为elisa投上一票。

  Elisa生化原理

  含有代测抗原的溶液被加入到塑料制的多孔板中并静置一段时间，在这段时间里，抗原由于静电的作用、疏水作用、范德华力被物理吸附在多孔板中，吸附结束后，我们就会吸去没有吸附的溶液部分。

  再加入不会和抗原起反应的蛋白溶液，比如牛血清白蛋白（BSA）来封闭多孔板中，没有被覆盖的区域。这样，之后加入了蛋白质就不会由于物理吸附残留在多孔板里。

  完成封闭后，我们就可以加入特异性识别待测抗原的抗体，在这些抗体上，我们事先链接上了可以催化变色的反应的酶。洗去没有特异性结合的抗体之后我们就加入显色底物由链接的酶催化显色反应，最终我们通过分光计来测量每个样品中的显色程度，从而判断原始抗原的浓度。

  在这个基础版的elisa有一个明显的问题，就是物理吸附阶段特异性还有偏差，在物理吸附过程，抗原蛋白需要和其它蛋白竞争来进行物理吸附，导致溶液杂质蛋白成为一个干扰项。而在定量过程就会出现一个偏差，为了解决这个问题，我们只需要把第一步的物理吸附改为特异性吸附，这就成为如今主流的ELISA方法——三明治法

  在三明治法中，多孔板先被针对代测的抗原进行预处理，定量包埋封闭上特异性抗体，这样处理之后，加入待测溶液的时候，抗原就不在和杂质进行竞争。而是直接被吸附于预先包埋的抗体上，后续的检测完全不变。三明治法非常简单，准确性也很高。因此，很快成为实验室以及临床检测中的主流方法之一。

  这种方法最大的缺点则是，针对待测的抗原，我们需要生产两种结合在不同位点的特异性抗体，如果代测抗原不主流、没有两种好用的抗体，就难以检测。另外还有一个小缺点就是有时候会出现两种抗体的非特异性结合，从而产生假阳性。

  因此必须有非常严谨的阴性对照来确保结果的有效性。如果我们没有两种好的抗体来使用三明治法，还有一种常用的elisa方法，就是竞争法。

  竞争法ELISA（也称抑制或封闭法ELISA）通过定量某种样品分析物对预计信号的干扰，来测定该分析物在样品中的含量，可通过以下方式进行：微孔板用一种分析物或一种对靶标分析物具有特异性的抗体包被（即直接法和间接法），再添加一种有部分某种检测的靶标分析物，以竞争结合抗体上的位点。信号与分析物含量呈负相关，因此，如果靶标分析物的浓度较分析物高，靶标分析物竞争性结合有限量的标记抗体，参考信号将会较靶标分析物的浓度较低的情况增强。

  上文为大家介绍的ELISA检测试剂盒，分别从ELISA历史、抗原抗体反应、ELISA原理及ELISA方法介绍，也希望上述内容对大家有所帮助！