【通蔚生物】：活性蛋白提取试剂盒的应用

【通蔚生物】：活性蛋白提取试剂盒的应用

活性蛋白提取试剂盒用于从动物组织中提取有活性的总蛋白，该试剂由一种温和的非离子型去污试剂、缓冲试剂和氯化钠等组成。采用匀浆或超声破碎时，该试剂高效提取的蛋白质可以尽可能地保持活性，可以用于1D和2D电泳、免疫共沉淀、Pull down、EMSA、报告基因分析（Luciferase、β-galactosidase、Chloramphenicol Acetyltransferase等）、蛋白质激酶分析（PKA、PKC、Tyrosine Kinase等）、酶免分析（Western Blot、ELISA、RIA）、蛋白质纯化等实验，含有的去污试剂可通过透析去除。

活性蛋白提取试剂盒由抽提试剂、蛋白酶抑制剂混合物、DTT和PMSF组成。

特点：
整个实验过程只需要20 min左右；
可以处理20×100 mg的动物组织样品；
提取的蛋白质可以透析去除离子和去污试剂，或将缓冲液替换为所需要的合适缓冲液；
提取的活性蛋白质保持非变性状态，可以直接用于1D和2D电泳、Pull Down、EMSA、免疫共沉淀、蛋白纯化、酶活分析等实验；
可以维持报告基因酶（Luciferase、β-galactosidase、Chloramphenicol Acetyltransferase等）、蛋白质激酶（PKA、PKC、Tyrosine Kinase等）的活性。

操作步骤
1.将100 mg组织剪切成小块，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，加入适量的预冷的1X PBS于4°C，700 g（3000rpm）离心3 min，弃掉上清，重复洗涤两次。

2.向以上洗涤后的组织中加入1 mL预冷的抽提试剂（使用前向每1 mL抽提试剂中加入1μl DTT，10μl PMSF，1μl蛋白酶抑制剂），置玻璃匀浆器冰上均质30~50次至组织完全成匀质状液体无明显组织小块。

3.最大速度涡旋振荡10 sec，冰上放置20 min，期间取出振荡3~5次，再于4°C，12830g（12000 rpm）离
心10 min以沉淀组织或细胞碎片，转移上清为组织活性总蛋白部分，分装并保存于-80°C，用于下游实验。