ELISA，即酶联免疫吸附实验，其基本原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待检标本，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。ELISA技术作为免疫标记技术（包含免疫荧光技术，免疫放射技术，免疫酶技术和免疫胶体金技术）中的一种，已广泛应用于科研和临床实验中，具有快速、定性或者定量甚至定位的特点。
酶标板作为ELISA实验辅助的器材，起着举足轻重的作用。正确使用酶标板可以提高ELISA实验最终结果。因此，选择一款抗原/抗体吸附灵敏度高、对抗原/抗体吸附能力孔间差异小、批次间差异小的酶标板产品，是实验者获得可靠、稳定实验结果的保障！如何选择呢？今天，上海通蔚生物带大家从酶标板材质、孔型和颜色等分类详细介绍。
图1 酶标板
酶标板材质
酶标板根据材质划分，可以分为聚苯乙烯（PS）、聚丙烯（PP）和其他材质（如聚碳酸酯（PC）等，具有特殊的物理或化学性质）。
聚苯乙烯（PS）或许对大多数实验小伙伴们比较了解，这种材质是实验使用比较广泛的材质。聚苯乙烯具有疏水性，但可以通过进行表面处理或涂层来改变其性质，以适应不同应用的不同要求，其特性使其最适合显微成像和光学测量。
聚苯乙烯由脂肪族碳链和悬垂的间歇性苯环组成。这提供了非常疏水的表面，这种类型的微孔板通常被称为“中等结合”微孔板。关于中等结合，我下文会讲到。
可以通过表面处理（例如辐射）来增强结合能力，辐射会破坏一定数量的苯环，产生羧基(COOH)和羟基(OH)基团。这些基团的存在为亲水相互作用提供了机会。以这种方式改性的微孔板通常称为高结合。所得表面主要是疏水性的，具有间歇性羧基和羟基，能够与生物分子上带正电的基团发生离子相互作用。
聚丙烯(PP)是一种由丙烯单体制成的低密度、抗应力热塑性塑料。这种线性烃树脂的化学式为(C3H6)n。它是由意大利科学家在20世纪50年代中期发现的，如今已成为继聚乙烯之后产量第二大的塑料。
聚丙烯是一种热塑性材料，因此，它可以加热到熔点，冷却，然后再次加热，而不会发生任何明显的劣化。这种特性，加上它在高温下液化而不是燃烧的能力，是使聚丙烯成为注塑等制造应用的热门选择的两个关键属性。这种材料的其他一些特性包括：
耐化学性：聚丙烯耐稀碱和酸，非常适合用作盛放清洁溶液等液体的容器。
韧性：聚丙烯在有限的挠度范围内具有弹性，但它也可以被视为一种坚韧的材料，因为它在变形过程的早期经历塑性变形。韧性是指材料吸收能量和弯曲而不开裂的能力。
绝缘：聚丙烯具有高电阻，使其成为电子元件的理想选择。
由于其耐化学性、耐细菌性和耐蒸汽灭菌性，聚丙烯还用于各种实验设备，以下是聚丙烯（PP）比较适合的实验类型：
细胞培养：聚丙烯培养皿、培养瓶等，因为其耐高温、耐腐蚀、不易吸附细胞，可以用于细胞培养、培养基储存等。
离心管：聚丙烯离心管耐高温，可在高转速离心机中使用，适合样品处理、离心分离等实验。
移液管：聚丙烯移液管耐化学腐蚀，可用于吸取各种液体，并且可以进行高温高压消毒。
PCR管：聚丙烯PCR管耐高温，可以在PCR仪中使用，适合核酸扩增实验。
图2 96 孔 PCR 微孔板
其他：聚丙烯材质还可用于制作其他实验器材，例如，滴瓶、试剂瓶、培养皿等。
需要注意的是，聚丙烯的透光率低，不适合光学检测实验，例如，比色法、荧光法ELISA等。上述为大家介绍比较常见的酶标板材质，其它的因为时间关系，暂时不介绍，不过非常喜欢和大家一起交流和分享提高实验的效率。
根据孔型分类
1、孔数
微孔板孔数分为96、48和384孔。实验中比较常用的96孔，目前市面上大多数酶标仪兼容96孔。
2、孔底
根据微孔板底部分为平底、U型底、V型底。平底折射率较低，适合在酶标仪上检测；U型底的酶标板折射率较高，方便加样、混匀等操作；V型底部的ELISA板可以准确吸取样本。
3、颜色
微孔板通常有四种颜色：透明、黑色、白色和灰色。根据所用的检测模式，当非常亮和暗的样本相邻时，颜色可能会影响信号与背景的比率和孔与孔之间的串扰。因此，颜色选择不当可能会对您的数据产生负面影响。
吸光度测定需要使用透明（包括紫外线透明）微孔板，因为在此检测模式下，光必须穿过样品。
图3 透明色微孔板
黑色微孔板（由于碳的存在而变暗）会部分抑制样品的信号。这是因为黑色会部分吸收来自样品的光信号。因此，这些板非常适合荧光强度（包括FRET）和荧光偏振测定。这些通常是具有强信号产量的检测模式，使用黑色有助于减少背景、自发荧光和孔间串扰，从而提供更好的信号空白比。
图4 白色微孔板
黑色微孔板通常不推荐用于发光、时间分辨荧光(TRF)和TR-FRET检测，因为这些检测模式通常具有相对较低的信号产量，并且会被黑色进一步淬灭。建议使用含有二氧化钛的白色微孔板进行这些检测。孔的白色部分反映了样品信号，有助于最大化样品信号。缺点是白色微孔板也会增加空白信号。然而，这在发光检测中通常很低。在TRF中，延迟测量窗口消除了背景的影响。
图5 黑色微孔板
介于黑色和白色之间的中间解决方案是灰色微孔板。这些微孔板特别推荐用于AlphaScreen®和AlphaLISA®，因为它们可以减少串扰和背景，同时仍提供良好的信号。
4、酶标板结合力
孔的表面特性起着重要作用。在这里，样品和孔材料相互作用。通常，微孔板主要有三种类型：非结合或低结合、中结合和高结合。结合受材料物理特性的影响，可以通过应用不同的涂层来改变。
对于生化光谱和高通量筛选应用，通常选择无涂层的聚苯乙烯作为材料，并归类为中等结合。
非结合板可防止核酸、蛋白质和肽与孔表面结合。此时，特定涂层可降低检测背景并提高信噪比。
高结合微孔板通常用于需要将分子固定在孔表面的检测。其中最著名的用途之一是ELISA检测。在此，特定的涂层和处理会引入一定数量的亲水基团，以促进生物分子（例如抗体）的被动吸附。中结合微孔板和高结合微孔板通常在可用极性基团的数量上有所不同。
上述为大家介绍酶标板的选择技巧，除了选择正确酶标板之外，酶标板使用也非常重要，具体可以参考说明书，了解酶标板的注意事项。
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