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重组蛋白:重组蛋白生成及应用

发布时间:2024-11-28     发布作者:上海通蔚生物

  蛋白质是生物系统中的主力,促进细胞中的大多数生物过程,包括基因表达、细胞生长、增殖、营养吸收、细胞间通讯和细胞凋亡。重组蛋白是指通过基因工程技术人工合成或改造的蛋白质。重组蛋白广泛应用于生物学研究,重组蛋白已在多种实验室技术中得到证实,例如ELISA、蛋白质印迹和免疫组织化学(IHC)。接下来上海通蔚生物为大家详细介绍一下重组蛋白。

  什么是重组蛋白?


  重组蛋白是通常在实验室中通过基因工程改造的蛋白质。这些特殊蛋白质是通过将基因放入蛋白质中,然后将该蛋白质放入表达系统中而制成的。表达系统可能有所不同,但通常是细菌、酵母或有时是哺乳动物细胞。通过使用上述表达系统,可以大规模创建蛋白质,从而轻松复制和纯化。
重组蛋白

  重组蛋白质的生产过程


  1.基因克隆

  基因克隆是重组蛋白生产过程的第一步。它包括分离编码蛋白质的基因并将其插入适当的载体,例如质粒。载体是将基因呈递给宿主细胞进行转化的重要载体。

  2.转型

  一旦基因被放入载体中,载体就可以被放入宿主细胞中。这称为转化,可以通过多种不同的方法来实现。热休克或化学处理等方法可以转化宿主细胞。因此,宿主细胞将开始保留重组蛋白质DNA,从而能够表达蛋白质。

  3.表达

  此后,宿主细胞将在最佳条件下生长,以支持重组蛋白的表达。根据翻译后修饰和蛋白质所需的总产量要求,表达宿主可以是细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞。

  4.净化

  重组蛋白在宿主细胞中表达后,纯化表达产物至关重要。所用的纯化技术包括色谱技术,通常是亲和层析、离子交换层析或尺寸排阻层析。纯化可确保最终产品纯度高、无污染。

  5.表征

  表征是确认蛋白质身份、纯度和生物活性的过程。氨基酸测序和质谱是经常用于认证身份的技术。氨基酸测序以原子分辨率提供有关蛋白质序列的信息。质谱提供非常准确的分子量和翻译后修饰信息。关键的验证技术是蛋白质印迹法,其中蛋白质通过SDS-PAGE分离,然后转移到膜上,用特异性抗体探测膜以识别和确认目标蛋白质的大小。

  纯度评估使用多种技术来证明重组蛋白中不存在污染物。SDS-PAGE是一种重要的分子量分离技术,单一清晰的条带表示高纯度。HPLC可以量化蛋白质混合物成分的分离,提供有关纯度和均质性的完整信息。尺寸排阻色谱法、SEC或凝胶过滤根据大小和形状分离蛋白质,从而检测聚集体并确保蛋白质的单体形式最普遍。所有这些方法确保用于研究、医学或工业进一步应用的重组蛋白是纯净的、正确折叠的和具有生物活性的。

  重组蛋白的应用


  1.医学

  重组蛋白在医学领域与治疗剂、疫苗和诊断工具的开发有关。其中一个重要应用是利用重组DNA技术生产胰岛素,这对治疗糖尿病至关重要。重组蛋白在治疗多种疾病和病症方面也发挥了重要作用,例如促红细胞生成素、生长激素和单克隆抗体。

  2.研究

  重组蛋白是科学研究中非常关键的工具之一。它们有助于研究蛋白质的结构和功能、研究细胞过程以及开发新的检测方法和技术。最常用的重组蛋白之一是绿色荧光蛋白,它使实时检查和追踪细胞过程成为可能。

  3.生物技术

  在生物技术中,重组蛋白用于制造酶、生物燃料和工业化学品。借助重组DNA技术获得的酶已应用于许多行业,例如食品、饮料、制药和农业。与天然酶相比,此类酶通常具有更高的稳定性、特异性和效率。

  4.农业

  农业中的此类重组蛋白有助于提高农作物产量、抵抗害虫和病原体以及转基因生物。例如,重组牛生长激素(rBST)可提高奶牛的产奶量,重组疫苗可预防牲畜的传染病。

  上述是重组蛋白的相关介绍,生物技术领域的进步促进并促进了重组蛋白在各种应用领域的生产。我们也期待看到重组蛋白在治疗各种疾病方面取得更多进展。