【通蔚生物】: 石蜡切片免疫组化原理

石蜡切片免疫组化原理将样本固定后包埋到石蜡内，将包埋后的组织切片经脱蜡处理并微波修复抗原，加3%过氧化氢阻断组织内源性过氧化物酶，一抗特异性结合目的蛋白，4 ℃孵育过夜后，37 ℃复温30 min，PBS洗涤干净后加入二抗孵育35 min（二抗结合特异一抗），洗净后加显色剂，二抗的标记与显色剂反应显色。显色完成后加苏木素复染细胞核，1%的盐酸酒精分化后，水洗返蓝再脱水封片，晾干后即可在镜下观察组织阳性表达分布。

1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时） 。
2．过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2 O2 ，室温 10 分钟（避光）
3．蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床） 。
4．抗原修复：根据待检测的抗原，选择适当的方法。
5．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床） 。
6．正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 （保持组织呈湿润状态,）滴加正常山羊或兔血清 （与第二抗 体 同源动物血清）处理，37℃，15 分钟。
7．苏木素复染，室温，30 秒，自来水冲洗。
8．梯度酒精脱水：80%，2 分钟 95%，2 分钟 100%，2 次，5 分钟。
9．二甲苯透明：I ，II （二甲苯）各 5 分钟
10．封片：加拿大树胶（或中性树胶）封片