什么是elisa试剂盒？elisa试剂盒是用来检测什么的？

什么是elisa试剂盒？elisa是最经典的一种免疫学实验操作实验，中文名字叫酶联免疫吸附测定实验。酶联免疫吸附实验（elisa）是一种用来定量检测样本中的某种抗原方法。因此，因此在许多研究和检测领域中使用 ELISA 来检测和定量各种样本类型中的抗原，如使用 ELISA 分析细胞裂解物、血样、食品等特定物质。常见检测领域包括如生物学、医学、农学等。

Elisa试剂盒原理

酶联免疫吸附实验（elisa）是一种高敏度的定量实验，通常用于测量生物样品中分析物的浓度，如细胞因子和抗体。这种方法的一般原理包括三个步骤：

首先是将目标分析物捕获或固定在微孔板上，然后用目标特异性检测蛋白检测分析物，最后就是酶反应，既共轭酶将底物转化为有色产物。根据不同的捕获方法和检测方法，elisa可以分为四种方法。

elisa方法

ELISA有四种主要的方法：直接法、间接法、夹心法和竞争法。每种类型的描述如下，并用图说明了分析物和抗体是如何结合和使用的。

1.直接法（酶标抗体结合抗原）

待测抗原粘附在微孔板的孔内，然后使用带酶标的一抗与抗原结合，最后加入底物进行显色，并检测吸光度。由于吸光度的大小与抗原体复合物的数量成一定的线性关系。因此，也就间接的实现了测定抗原数量的目标。

2.间接法（一抗结合抗原，酶标二抗结合一抗）

和直接法的区别在于两种抗体代替一种抗体，结合抗原的抗体（一抗）不带酶标记物，当抗原和抗体结合后，再使用带酶标的二抗结合一抗，加入底物显色并检测。

3.夹心法（捕获抗体和一抗结合抗原，酶标二抗结合一抗）

在间接法基础上又再发展出更为复杂的夹心法，它在微孔底部预先包被一种捕获抗体，用于结合抗原，在这个复合物的基础上再结合一抗、二抗并检测。

	直接法	间接法、夹心法
优点	操作简单 不存在抗原和二抗发生交叉反应导致的结构错误	二抗选择面广泛，制备也比较简单，大大降低成本；酶标种类也有更多选择 一抗无需考虑标记酶标信息，所以它在制备过程可以尽可能的保证免疫结合活性，检测灵敏度大大提高，因为信号得到放大。
缺点	检测抗体制备比较困难且成本比较高，因为既要保证免疫活性还要标记酶信息，检测信号无法放大，信号越弱	潜在的二抗与目标抗原发生反应，造成信号错乱风险，更多操作步骤，反应时间更长。

  4.竞争法（酶标抗原和抗原竞争结合抗体）
  
  无法同时结合捕获抗体和一抗的话，就不适合用夹心检测。此时可以在微孔板孔内包被抗体，同时提供带标记的同种抗原，把待检测抗原和标记抗原一起加入和抗体结合，由于两者会竞争结合抗体，所以最终检测的信号越高，证明代测抗原越少，反之则越多。

  

  Elisa试剂盒检测步骤

  
  ELISA 是最简单的血液检测之一。它快速、快捷，并且需要患者的血液样本。ELISA的整个过程如下所述。
  
  抗体附着在作为固体表面的聚苯乙烯板上，并被细菌、其他抗体和激素吸引或具有亲和力。
  
  将抗原-抗体混合物填充到包被有抗原的微量滴定板上，然后通过洗涤除去游离抗体。
  
  添加对一抗具有特异性的二抗，该二抗通常与酶结合。
  
  通过清洗板去除游离的酶联二抗。
  
  最后，添加底物。底物被酶转化形成有色产物，可以通过分光光度法进行测量。
  
  通过ELISA检测表明怀孕的HCG蛋白。将血液或尿液样本和与酶连接的纯化 HCG 组合添加到系统中。如果测试样品中不存在 HCG，则只有连接的酶与固体表面结合。
  

  感兴趣的物质越多，发生的反应就越多，与固体表面结合的连接酶就越少。这些反应通常通过溶液颜色的变化来指示。

  

  Elisa试剂盒的优点

  
  以下是 ELISA 技术的一些优点：
  
  由于使用了两种抗体，从 ELISA 获取的结果可以准确诊断特定疾病。
  
  可以对复杂的样品进行检测，因为不需要纯化抗原即可检测。
  
  由于可以进行直接和间接分析方法，因此反应灵敏。
  
  这是一个快速测试，很快就能得出结果。
  
  ELISA 的可能检测范围包括定量、半定量、标准曲线、定性、校准曲线模型等。
  
  与需要放射性物质存在的其他测定相比，更容易执行且过程简单。
  

  elisa试剂盒是用来检测什么的

  
  Elisa检测如下：
  
  可以确定样品中抗体和抗原的存在。
  
  它在食品工业中用于检测存在的任何食品过敏原。
  
  测定病毒测试中血清抗体的浓度。
  
  在 疾病爆发期间，为了评估疾病的传播，例如在最近的 COVID-19 爆发期间，正在使用快速检测试剂盒来确定血液样本中是否存在抗体。
  

  ELISA常见问题解答

  
  1. 试剂盒从冰箱拿出后未充分平衡室温，会有什么影响？
  
  如果试剂盒从冰箱中拿出后未充分平衡至室温（20～25℃），可能会导致温育时间不够，从而使OD值偏低。
  
  2. 移液器吸液量不足或吸头内壁不清洁，会造成什么后果？
  
  移液器吸液量不足或吸头内壁不清洁，都可能导致加样量不足，造成OD值偏低。此外，吸头内壁不清洁还可能导致非特异性吸附，进一步影响实验结果。
  
  3. 操作顺序颠倒或遗漏步骤，会有什么后果？
  
  如果操作顺序颠倒或遗漏步骤，很可能导致实验失败，例如漏加酶结合物、显色剂等，使整块ELISA板都不显色。
  
  4. 温育时间不够或温育温度未达到要求，会有什么影响？
  
  温育时间不够或温育温度未达到要求，都会影响反应的进行，导致OD值偏低。例如，保温用的湿盒没有预温，或培养箱温度不符合操作要求等。
  
  5. 洗板液在配置过程中出现问题，会造成什么后果？
  
  洗板液在配置过程中出现问题，如量筒不干净、含有酶抑制物、浓度过高等，都可能导致洗去特异性结合物，使OD值偏低。
  
  6. 洗板时冲击力太大、浸泡时间过长、洗板次数过多，会有什么影响？
  
  这些操作都可能导致洗去结合在包被板的特异性结合物，从而使OD值偏低。
  
  7. 加完终止液后没有轻轻充分混匀ELISA板液就立即读数或放置太久才进行读数，会有什么影响？
  
  这可能导致检测OD值偏低或偏高。一般建议在加完终止液后3分钟之内进行读数。
  
  8. 酶标仪检测波长设定有误，会有什么后果？
  
  如果酶标仪检测波长设定有误，例如选用的波长不是产物的敏感吸收峰，可能会导致OD值偏低或偏高。
  
  9. 阴性对照出现阳性结果，可能的原因是什么？
  
  阴性对照出现阳性结果可能是由于样品、试剂被污染，或加样时操作不当导致相邻孔之间溶液溅洒出现交叉污染。此外，抗体量过多导致非特异性结合也可能是一个原因。
  
  10. 酶标板整体背景高，可能的原因是什么？
  
  酶标板整体背景高可能是由于底物孵育过程没有避光，导致背景信号增强。
  
  11. 复孔之间重复性差，可能的原因是什么？
  
  复孔之间重复性差可能是由于加样本及试剂量不准、孔间不一致等原因造成的。此外，操作条件、人员等的不一致也可能导致重复性差。
  
  12. 阳性对照值偏低或低吸光度，可能的原因是什么？
  
  阳性对照值偏低或低吸光度可能是由于温育的时间或温度不够、显色反应时间太短、显色液变质或试剂过期、试剂稀释有误等原因造成的。