减少ELISA实验误差8大妙招，你知多少？

  在ELISA实验过程，我们实验过程经常会出现一些误差，例如操作误差、样本试剂误差、仪器误差等。为了实验更顺利进行，我们需要了解酶联免疫吸附实验常见的误差。今天，通蔚生物为大家详细介绍下在ELISA实验中常见的误差。

  1、留意试剂盒保质期。买回来的试剂盒除了正确的保存之外，要留意试剂盒的保质期，过期的试剂盒请误用于实验。

  2、咨询阅读说明书。在进行ELISA实验前，请详细阅读说明书，严格按照说明书规范进行规范化操作。对于不同批号的试剂盒不可混用，对于值得改进的地方要反复实验确定成立后才能改进。

  3、评估试剂实用及稳定性。试剂的稳定性和实用性保证实验结果的准确性、可靠性和可重复性至关重要！在试剂启用之前，务必进行阴、阳对照及样品反复比照试验，如试剂符合要求，方可使用。

  4、使用校对过的微量移液器，排除自然误差。移液器应该定期校准，频率取决于使用频率、环境条件和实验室的质量要求。一般建议至少一年校准一次，如果使用频繁或对精度要求较高，则需要更频繁地校准，例如每三个月或半年一次。如果移液器曾经跌落、损坏或暴露在极端环境下，则需要重新校准。

  5、加样准确，快速。加样或多或少，对酶生成物的量不能确定，直接会影响显色的结果。显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关！因此，加样要慎重！这里要求大家在加样尽量做到在一定时间内加样完毕的实验，如果加样迟缓，便出现误差，而且试剂长时间暴露在外，尤其室温过高时，保存期会缩短甚至失效。

  6、洗涤液要新鲜，洗涤要彻底。不新鲜的洗涤液会出现本底增高现象，也可能出现假阳性。这里要求大家在使用洗涤液现用现配的原则；在洗涤过程要彻底，否则酶结合物本底显色会呈现假阳性。

  7、严格的控制反应时间。 反应时间过长，酶容易失活；反应时间过段，酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合，生成物结构松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假阴性。

  8、严格的掌握显色时间。认真阅读试剂盒说明书，每个ELISA试剂盒都有其推荐的显色时间范围，通常在5-30分钟之间。显色时间过短，加入终止液反应终止后，底物结合物的量过少，易出现假阴性；如果超过显色时间，如操作误差（如孵育温度过高）、试剂污染等也可能导致非特异性显色，这些情况也可能造成颜色过深。

  上述为大家介绍ELISA实验过程如何避免误差，细节决定成败！从细微的实验中观察，实验和总结，避免因误差导致实验反复！也希望上述内容对您的实验有所帮助，如果您还有更好的减小实验误差妙招请多交流！