【通蔚生物】: ELISA帮你介绍生物素亲和素系统操作

ELISA帮你介绍生物素亲和素系统操作

生物素亲和素(又称抗生物素)系统(biotin avidin system,BAS)标记抗体的技术是20世纪70年代后期发展起来的一种新的免疫检测方法。由于亲和素与生物素间的亲和力极强，结合迅速，且极其稳定，生物素系统标记抗体和酶化的标记率高，又不能影响蛋白的活性，使BAS标记技术比常规酶联免疫、放射免疫及荧光免疫技术有着更高的灵敏度，为微量抗原、抗体的检测开辟了新的途径。近年来，在BAS检测中多用链霉亲和素“streptavidin,SA”，它是链霉菌系统培养过程中的引起分泌物，完整的链霉亲和素和从卵白中提取的亲和素一样，也由4条相同的肽链组成。因链霉亲和素在检测应用中发生的特异性和非特异性结合的亲和素低，所以日渐受重视，已经有取代亲和素之势。

BAS ELISA检测的方法可分为以下具本内容：
①对于抗原抗体系统，包括免疫细胞化学、ELISA、免疫印迹法等都适用，应用程度范围广；
②BAS在温和条件下可与各类生物大分子如蛋白质、脂多糖等结合，并且这种结合对原生物大分子的生物活性无影响；
③每个亲和素分子可与4个生物素分子结合，所以可以偶合更多连接生物素的酶分子，从而大大提高了灵敏度；
④生物素和亲和素间亲和力强，故二者一旦结合，就极为稳定，不受在ELISA方法中的保温及多次洗涤影响，而且这种结合反应时间比抗原抗体反应所需时间短；
⑤结果专一性强，非特异性显色或染色背景极低；
⑥第一抗体稀释度高，可节约抗体。

生物系亲和素系统有以下原理：
1.BA法亦称LBA法。系将特异性抗体生物素化，将酶分子标记在亲和素分子上，生物素的抗体与抗原结合后，再借BAS ELISA的亲和力将酶分子联结到抗原分子上，经酶促反应即可检出抗原。
2.BAB法亦称BRAB法。将特异性抗体系统的生物素化和酶标生物素联成一体。
3.ABC法原理与BAB法基本相同，只是亲和素和酶标记生物素需要先按一定比例形成复合物，这种框架结构结合了形成大量的酶分子，当亲和素尚未被酶标生物素饱和时，生物素化抗体即可与之结合。

以上便是BAS ELISA的三种基本检测法。上述方法中，如将第二抗体生物素化，即为间接法。由于间接法增加了一级抗原抗体反应，因而比直接法更敏感，应用范围更广。近年来许多学者对上述基本方法进行了改良，有人用亲和素抗体或A蛋白作桥联物。另外还发展了BA ELISA竞争法和抑制法等。

生物素或亲和素与抗体分子或标记物结合后，既不影响前者的亲和力，也不改变后者的特性。亲和素分子的4个活性部位并非都和连接在抗体分子上的生物素残基结合，剩下的游离部位尚可作为另一种生物素标记蛋白质的受体。这些特点就是BAS免疫标记技术的基础和原理。