ELISA 样品制备和采集指南

  为了更好的实验准确性，上海通蔚根据多年经验为大家列出的 ELISA 样品采集和储存条件仅供一般指导。具体方案可能因细胞系或组织类型而异。如果长时间储存样品，建议测试样品稳定性。避免所有样品类型重复冻融循环。

  血清- 使用血清分离管 (SST)，让样品在室温下凝结 30 分钟，然后以 1000 x g 离心 15 分钟。立即取出血清并进行测定，或等分并将样品储存在 ≤ -20 °C 下。

  血浆- 使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。收集后 30 分钟内以 1000 xg 离心 15 分钟。立即测定或等分并将样品储存在 ≤ -20 °C 下。

  贫血小板血浆- 使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。收集后 30 分钟内以 1000 xg 离心 15 分钟。建议在 2-8 °C 下以 10,000 xg 对血浆进行额外的离心步骤 10 分钟，以完全去除血小板。立即测定或等分并将样品储存在 ≤ -20 °C 下。

  细胞培养上清液- 通过以 500 xg 离心 5 分钟去除颗粒。立即除去上清液并进行测定，或等分并将样品储存在 ≤ -20 °C 下。

  组织匀浆-组织匀浆的制备将根据组织类型而变化。用 1X PBS 冲洗组织以去除多余的血液，在 20 mL 的 1X PBS 中均质化，并在 ≤ -20 °C 下保存过夜。进行两次冻融循环以破坏细胞膜后，将匀浆以 5000 x g 离心 5 分钟。立即取出上清液并进行分析。或者，将样品等分并储存在 ≤ -20 °C 下。

  细胞裂解物- 将细胞溶解在裂解缓冲液中并置于冰上 30 分钟。以 14,000 xg 离心管 5 分钟以除去不溶物质。将上清液等分到新管中并丢弃剩余的全细胞提取物。使用总蛋白测定定量总蛋白浓度。立即测定或等分并储存在 ≤ -20 °C 下。

  组织裂解物– 用 PBS 冲洗组织，切成 1-2 mm 的块，并用组织匀浆器在 PBS 中匀浆。添加等体积的含有蛋白酶抑制剂的 RIPA 缓冲液，并在室温下轻轻搅拌裂解组织 30 分钟。离心去除碎片。使用总蛋白测定定量总蛋白浓度。立即测定或等分并储存在 ≤ -20 °C 下。

  唾液- 将唾液收集到管中并以 10,000 x g 离心 5 分钟。收集水层，立即进行测定或等分并将样品储存在 ≤ -20 °C 下。

  尿液- 无菌收集当天的第一次尿液（中流），直接排入无菌容器中。离心去除颗粒物质。立即测定或等分并储存在 ≤ -20 °C 下。

  母乳- 在 2-8 °C 下以 1000 xg 离心 15 分钟。收集水性部分并重复此过程总共 3 次。立即测定或等分并储存在 ≤ -20 °C 下。R&D Systems 为您的研究提供广泛的 ELISA 产品组合。

  上述为大家总结ELISA样品制备和采集指南，这些是制备用于 ELISA 试验的常用待测样品的一般指导原则。与试验开发的所有方面一样，最佳样品制备程序因实验目标的不同而有所不同。开发新的实验时，最好查阅文献，以获得与您自己的样品类似的实验示例。