ELISA实验方案：从设计到分析，全方位解读

  酶联免疫吸附试验(ELISA)因其高灵敏度而受到青睐，能够检测出非常低浓度的物质（低至每毫升0.0001-0.01毫克）。它广泛用于查找和测量肽、蛋白质、抗体、激素、药物和潜在的食物过敏原，如牛奶、花生和鸡蛋，这些对于转基因食品检测很重要。它的工作原理是利用抗原和抗体之间的特定相互作用，以及产生可检测信号的酶。ELISA于20世纪70年代开发，利用抗体的精确度和酶的活性来分析生物样本，从而提供一种灵敏而具体的方法。随着时间的推移，ELISA不断改进以提高其灵敏度，现在有不同类型的ELISA来检测各种生物标志物。

  Elisa实验方案：

  一、涂层：

  涂层将抗原或捕获抗体固定在微量滴定板上。

  这是通过将培养皿与含有抗原或抗体的溶液一起孵育来完成的。

  抗原或抗体的选择取决于具体的应用和靶分子。

  适当的浓度和孵育时间对于成功的检测结果至关重要。

  二、阻塞：

  阻断可防止微量滴定板上的非特异性结合。

  降低背景噪音并提高检测特异性。

  用一抗或抗原包被后，向孔中添加封闭蛋白（例如，BSA、酪蛋白或牛奶）。

  阻断蛋白质与未占据的位点结合，减少非特异性结合。

  孵育培养板以允许阻断蛋白结合，然后用缓冲液洗去多余的蛋白。

  阻断后，可将一抗或抗原添加到孔中。

  三、样品和标准添加：

  标准通常是一组已知浓度的抗原，用于生成校准曲线。

  将已知浓度的标准品添加到板的单独孔中，而将未知样品添加到重复的或重复的三孔中。

  四、一抗孵育：

  此步骤涉及添加特定的一抗以结合微量滴定板上的抗原。

  一抗通常来自特定物种（例如小鼠或兔）并且可以被标记或未标记。

  如果一抗未标记，则稍后添加与酶（例如HRP或AP）偶联的二抗以产生可测量的信号。

  五、二抗孵育：

  一抗-抗原复合物将二抗连接至微量滴定板。

  这种连接使得酶能够与底物结合并产生可测量的信号。

  来自酶偶联二抗的信号与样品中一抗或抗原的量成比例。

  六、底物添加：

  底物与二抗偶联的酶发生反应，产生可检测的信号，该信号可使用微孔板读数仪进行量化。

  显色底物会产生可在特定波长下读取的有色反应产物，而化学发光底物则会发出光，可通过光度计进行测量。

  应优化反应时间和底物浓度以产生足够的信号而不引起背景噪音。

  七、停止解决方案：

  常用的终止溶液是硫酸，在底物孵育步骤后将其添加到孔中。

  添加终止溶液对于确保反应不再继续以及产生的信号稳定且可重复至关重要。