【通蔚生物】流式细胞术试剂篇知识分享

在流式细胞术中会使用多种荧光试剂，包括荧光偶联抗体、DNA结合染料、活性染料、离子指示剂染料和荧光蛋白。
在过去的几年里，由于相关试剂种类和数量的增加，用于流式细胞术实验的参数数量发生了爆炸性增长。比如，用于偶联单克隆抗体的荧光染料，如串联染料和聚合物染料的数量急剧增加。此外，除了GFP之外，可用于转染的荧光蛋白也有所增加，如mCherry、mBanana、mOrange、mNeptune等。本文就为大家介绍一下常用的流式荧光试剂。
有机小分子
有机小分子如荧光素(MW=389 D)、Alexa Fluor 488(荧光素类似物)、Texas Red(325 D)、Alexa Fluor 647(1464 D)、Pacific Blue和Cy5(762 D)通常用于抗体偶联。它们具有一致的发射光谱，但有一个小的Stokes位移(激发波长和发射波长之间的差，约50-100 nm)。有机小分子很稳定，且很容易与抗体结合。目前，一些染料(例如Alexa Fluor, Thermo Fisher)经过特殊设计，可减小成像时的光漂白效应，是样品需要成像分析时更好的试剂选择。
藻胆蛋白
藻胆蛋白是来源于蓝藻、鞭毛藻等藻类的大型蛋白质分子。藻胆蛋白的分子量大(例如藻红素(PE)的分子量为240kD)，非常适合于定量流式细胞术，因为它们在偶联过程中通常有1:1的蛋白质与荧光色素比例。藻胆蛋白具有较大的Stokes位移(75-200 nm)和稳定的发射光谱。然而，藻胆蛋白易受光漂白效应影响，不建议长时间或反复暴露于激发光源。常用的藻胆蛋白有藻红蛋白(PE)，藻蓝蛋白(APC)和叶绿素蛋白(PerCP)等。
量子点
量子点(Qdots)是半导体纳米晶体，具有与纳米晶体尺寸相关的紧密荧光发射光谱。它们最适合用紫外或紫色激光激发，但也可能被多个激光最低限度地激发。当 Qdots 用于多参数实验时，这种最小激发使荧光补偿复杂化。由于补偿问题和难以结合抗体，Qdots在多参数染色面板中已在很大程度上被聚合物染料取代。