【通蔚生物】: 如何选择流式抗体的几大要素

如何选择流式抗体的几大要素

流式抗体荧光搭配主要由几个因累决定的：流式细胞仪能检测多少个通道，需要同时检测多个指标，厂家的抗体有多少种荧光标记，如果流式细胞仪的通道越多。

流式抗体的几大要素如下：

1. 常用克隆
对于特定的细胞表面抗原CD家族蛋白，通常会有多种不同克隆号的单抗。流式细胞实验中使用的克隆号越常见，实验获得成功的几率也越大。
2. 高染色指数
高染色指数有利于阳性和阴性细胞群的分离，特别是检测的目的蛋白表达量低的情况下。
3. 低背景结合
虽然通常使用同型对照或者抗原保守区阻断剂（Fc Blocking Reagent）可以降低背景，但荧光染料与抗体的偶联效果不佳会明显加重背景结合。降低背景使得界定阳性和阴性细胞更加容易。

流式抗体使用注意事项：
1、建议实验的流式细胞的数量和抗体的比例要选择适当。细胞实验过量或抗体过量都有可能使实验结果受影响，因此需要优化试验条件。注：不同的流式技术对抗体的需求量有较大差异，例如传统一般的流式细胞术需要1×106个细胞为开始起始上样量，抗体用量为多少，而微流式细胞术一般则只需5×105个细胞，抗体用量减少到5μl。
2、直标记的流式的抗体应该4℃避光保存，不需要冷冻。
3、尽量选择经实验验证过的流式抗体，以保证实验结果的准确性。

随着流式细胞术应用领域的日益广泛，流式抗体及荧光标记产品的种类繁多、数量也在不间断增多，加上多色分析实验的方案需求的增长，逐渐产生了抗体难选择、荧光难搭配等问题，给实验顺利开展带来了诸多困扰