认识免疫学试验——酶联免疫吸附测定 (ELISA)

  酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种常用于测量生物样品中的抗体、抗原、蛋白质和糖蛋白的免疫学测定。比如：HIV感染的诊断、妊娠试验以及细胞上清液或血清中细胞因子或可溶性受体的测量。ELISA测定通常在96孔板中进行，可以在一次实验中测量多个样品。这些板需要是特殊的吸收板（例如NUNC免疫板）以确保抗体或抗原粘附在表面上。每种ELISA都测量一种特定抗原，并且针对多种抗原的试剂盒广泛可用。

  图1所示的ELISA是夹心ELISA，这里使用两组抗体来检测分泌产物，例如细胞因子。该方法按所示顺序逐步进行。

       第一步是用捕获抗体包被ELISA板，然后从板上洗掉任何多余的未结合的抗体。捕获抗体是针对目标抗原产生的抗体。

  第二步添加样品（例如尿液、血清或细胞上清液）。样品中发现的任何抗原都会与已经包被板的捕获抗体结合。样品通常一式两份或一式三份添加（以进行统计分析），并以不同的浓度添加，以保证其落在测定的检测水平内。再次从板上洗掉多余的样品。

  第三步添加检测抗体。该抗体用酶标记，通常是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。检测抗体与已与板结合的任何目标抗原结合。最后，将基材添加到板上。ELISA测定通常使用显色反应，将底物（例如TMB或ABTS）转化为有色产物，可以使用酶标仪进行测量。

  确定样品中的抗原浓度需要使用已知浓度的抗原制作标准曲线（如图2所示）。然后可以使用光密度(OD)计算样品中抗原的浓度。最后，如学了解更多ELISA，可以参考《ELISA是什么检测方法？带您深入了解ELISA》