牛血清知多少？一篇文章带你全面了解

  牛血清是动物血清一种，是细胞培养不可或缺的天然培养基。牛血清富含细胞生长必须的营养成份，通常含有一定比例的蛋白质、糖类、矿物质和维生素。牛血清按种类分为胎牛血清、新生牛血清、小牛血清。

  【胎牛血清】（FoetalBovineSerum，简称FBS）：是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。胎牛血清中含有丰富的生长因子、细胞黏附分子和其他细胞培养所需的成分，非常适合各种细胞的培养。

  这里值得注意的是由于其来源于胎儿，胎牛血清具有较高的胚胎抗原含量，因此在一些特定的细胞培养条件下需要小心使用。

  【新生牛血清】（NewbornCalfSerum，简称NBCS）：0—7天内（也有说法是0—30天内）;

  相比于小牛血清，新生牛血清中的生长因子和抗体水平较低。它的优势在于它的稳定性和较低的胚胎抗原含量，这使得它在一些特殊细胞类型的培养中更适用。

  【小牛血清】（CalfSerum）：采自出生30天至1年的小牛。它通常含有较高的成长因子和抗体水平，可以促进细胞的增殖和生长。小牛血清中的激素和免疫因子水平相对较低，这使得它在一些特定的细胞培养条件下更具优势。

  牛血清对细胞培养用途

  胎牛血清用途：胎牛血清是细胞培养常用的血清。适合多种细胞类型的培养，广泛应用常规细胞培养、细胞传代和细胞研究领域。胎牛血清采自发育中的牛胚胎，营养成分较为丰富，且此时的牛胚胎没有完整的补体系统，因此胎牛血清无需热灭活，内毒素含量低，保证细胞健康！

  新生牛血清用途：新生牛血清的营养成份略高于小牛血清，胚胎抗体水平较低，可用来培养肝细胞和骨髓细胞等细胞。

  小牛血清用途：小牛血清主要是提供基本营养物质，提供激素和各种生长因子、结合蛋白、促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用！适合哪些对激素、免疫因子要求较低的细胞。

  如何筛选牛血清？

  因胎牛血清使用较为广泛，这里我们重点介绍一下对胎牛血清的筛选。胎牛血清是细胞培养中常用的补充剂，其质量对细胞生长和实验结果至关重要。因此，在选择胎牛血清时，需要进行严格的筛选。

  1.pH值：首先，要确保胎牛血清的pH值在7.4至7.6的范围内，这与细胞生长的最佳生理环境相一致。

  2.有效成分：接下来，需要检查胎牛血清中细胞因子、生长因子、激素、粘附因子等有效成分的质量水平。这些成分对细胞生长、分化和存活起着关键作用。同时，还需要关注血清中免疫抑制因子的含量，因为过高的免疫抑制因子可能会抑制细胞的免疫反应。

  3.内毒素：内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁的一种成分，它可以诱导细胞凋亡，对细胞培养结果造成负面影响。因此，选择内毒素含量低的胎牛血清至关重要。

  内毒素含量越低，级别越高，以胎牛血清为例：

  血清中内毒素含量≤10EU/ml时，此血清为特级胎牛血清；

  血清中内毒素含量﹥10EU/ml，≤25EU/ml时，此血清为优级胎牛血清；

  血清中内毒素含量≥25EU/ml时，此血清为标准级胎牛血清；

  不同厂家，不同批次的血清，内毒素数值也可能有较大差异，因此很多血清厂家在名称上已不注明级别。但使用者仍可通过检测报告，自行甄别挑选

  4.细胞存活率：细胞存活率是衡量胎牛血清质量的重要指标之一。高品质的胎牛血清可以支持细胞的存活和增殖，使细胞在培养皿中生长良好。

  5.其他指标：除了上述指标外，还需要关注胎牛血清的血清蛋白含量、补体活性、病毒污染等指标。

  6.批次间差异：需要注意的是，即使同一品牌的不同批次胎牛血清之间也可能存在差异。因此，在选择胎牛血清时，建议根据具体的细胞类型和研究目的选择合适的批次。

  胎牛血清存储条件

  胎牛血清是细胞培养中常用的补充剂，其质量对细胞生长和实验结果至关重要。为了保持血清的活性，需要进行适当的存储和使用。

  1.存储：

  长期储存：胎牛血清应在-20°C或更低温度下冻存。

  短期储存：如果需要短期储存，可以将血清置于4°C冷藏，但应在一周内用完。如果您的实验用量较少，建议您选择分装的50ml规格，这可以有效地避免浪费和保证血清的质量。

  2.使用：

  解冻：解冻血清时，应采用缓慢解冻的方式，例如置于4°C冰箱过夜，避免快速解冻导致血清成分发生变化。

  配制：血清和培养基的配制应遵循“现用现配”原则，因为长时间储存会导致培养基成分发生变化，影响细胞培养效果。建议配好的培养液在3-5天内用完。

  避免反复冻融：反复冻融会破坏血清中的活性成分，降低血清质量，因此应尽量避免。

  避免在4°C或更高温度储存过久：长时间在4°C或更高温度下储存会加速血清的降解和污染，影响血清品质。

  3.其他注意事项：

  在进行血清操作时，应严格遵守无菌操作，并定期检查血清是否有污染迹象。

  胎牛血清融化注意事项及说明

  在水浴过程中，血清瓶的平面要完全浸在水中，并缓慢摇动瓶身，使血清均匀解冻，但摇动中尽量不要产生泡沫。血清从-20℃取出后，应先置于4°C冰箱过夜，第二天再进行水浴解冻。

  解冻后的血清，根据细胞类型和实验需求，按推荐体积加入到基础培养基中，充分混匀，制备成新鲜完全培养基（整个操作需在无菌超净台中进行，注意无菌操作）。配制好的完全培养基应在4℃冷藏保存，建议在3-5天内用完。

  以下是一些补充说明：

  在进行血清操作时，应佩戴手套，避免污染血清。

  配制培养基时，应先将基础培养基加热至室温，再加入血清，并充分混匀。

  胎牛血清需要热灭火吗？

  热灭活是指将血清加热至56℃，30分钟，以灭活血清中的补体。补体是一种在免疫反应中起重要作用的蛋白质，它可能对某些细胞类型有毒性或抑制其生长。在胎牛血清中，由于胎龄原因，尚未形成完整的补体系统，因此，胎牛血清不会真正干预免疫试验。故不需灭活。

  哪些情况对血清内毒素应格外留意筛选？

  在以下情况下，对血清内毒素应格外留意筛选：

  1.干细胞：干细胞对内毒素非常敏感，内毒素会导致干细胞死亡或功能异常。选择内毒素含量≤1EU/ml的优质血清对干细胞培养至关重要。

  2.免疫细胞：过高的内毒素会诱导免疫细胞释放炎症因子，影响免疫反应，例如抑制小鼠红细胞集落的形成。因此，选择内毒素含量低的优质血清可以减少内毒素对免疫细胞的影响。

  3.基因敲除相关的细胞实验：由于基因敲除实验需要保持细胞的原始状态，任何引导细胞衰老或凋亡的试剂都会影响实验结果。因此，在准备血清和其他试剂时，尽可能选择内毒素含量≤1EU/ml的血清，对实验至关重要。

  4.原代培养、杂交瘤融合、细胞转染：这些实验对细胞的健康和活力要求较高，选择内毒素含量低的优质血清可以提高实验成功率。

  5.难养细胞：难养细胞对培养条件要求较高，选择内毒素含量低的优质血清可以为细胞提供更好的生长环境，提高细胞存活率。

  6.长期培养、长期冻存、经常复苏：这些情况下，血清会经常或长时间作用于细胞。为保证细胞的健康，应选择内毒素含量低的优质血清，以避免内毒素长期累积对细胞的毒性影响。

  上述对牛血清的介绍，牛血清作为细胞培养的天然培养基，正确的选择对细胞培养非常关键。希望上述内容对您有所帮助！如果对牛血清还有疑问，欢迎在线咨询通蔚顾问。通蔚也为科研提供优级和特级胎牛血清用于细胞培养，欢迎前来了解！