从零到一：ELISA试剂盒实验步骤完全指南

  ELISA试剂盒实验步骤。大家在操作实验过程中，通常包括包被、封闭、洗涤、加入酶标抗体和显色液等。针对上述步骤，小蔚为大家一一详细介绍。

  第一步包被。把抗原和共享载体结合起来，之后就是比较重要一步就是洗涤，在整个ELISA实验过程相对来说比较重要的一步，每一次操作中间都要洗涤。洗涤液一般是缓冲液，里面加上吐温，土温是去污剂，可以有效把没有结合的物质洗掉。

  第二部是封闭。就是固相材体就相当于一个非常大的空间，抗原只是结合了其中非常少的一部分，其他地方还有很多待结合的位点，需要用到杂蛋白去把这些位点全部都覆盖起来，才能不让一抗和二抗与空白的位点结合。

  第三步是洗涤。封闭之后，还要把多余的蛋白洗涤之后，就可以进行加样，把待检抗体加进体系中，让待检抗体和包在固项载体上的抗原进行待异性的结合。把多余的待检测抗体洗涤之后，就会得到这样的抗原和抗体结合的复合物。

  第四步是加入酶标二抗。这部分抗体属于一抗的FC端结合的抗体，同时还带着酶标记，所以它是起到两种作用。把多余的二抗洗涤之后，就会形成一种二抗、一抗和待检测抗原的还有酶的复合物。

  最后就是加入显色液。可以让它产生颜色的反应。终止之后一般是加入氢氧根或者酸根离子，就是盐酸或者氢氧化钠去终止整个反应，这就是ELISA实验过程。

  接下来就是拿酶标语上去读数，得到最终把它量化的仪器叫做酶标语，就是专门去作为读数用的。一般来说现在用盐酸中指的波长反应是450纳米，去对它进行读数，最后对结果进行量化的体现。

  在ELISA过程中，要注意以下几点：

  第一点是包被液的选择。包被液就是把抗原包被在固相载体上的稀释液S包，一般是两种，一种是PBS，最常用的两种是PBS和CPS，其中这两个里面就更常用则是PBS。

  第二点是包被温度的选择。一般来说这边都是4度条件下，4度调一下包被过夜或者37度保温2小时，37度反应会更快一点，但是反应效果一般是没有4度是好的，所以剪映是4度条件下包被。

  第三点是包被浓度的选择。包被浓度是根据实验效果、实验条件还有包被物质的性质去改变的。一般来说包被浓度推荐是1-5微克每毫升。

  上述是elisa试剂盒实验步骤及注意事项，在elisa实验过程严格遵循说明书和注意事项，实验结果也会更加精确。