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一文盘点elisa与其它5种免疫测定法区别

发布时间:2024-08-14     发布作者:上海通蔚生物

  免疫测定法根据检测方法分类分为酶联免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫分析、荧光免疫分析、荧光免疫分析和蛋白质印迹法等。本篇文章上海通蔚生物给大家具体的说一下它们之间的区别。

  酶联免疫吸附试验和放射免疫分析

酶联免疫吸附实验

放射免疫分析

基本原理

使用与抗体相关的酶。

检测基于酶-底物反应的颜色变化或光发射。

使用放射性同位素标记抗原。

检测是基于测量抗原抗体复合物发射的放射性。

检测机制安全

产生可测量的颜色变化或光发射。

测量放射性同位素发射的放射性。

安全

安全、无辐射危害。

无需特殊处理或处置要求。

涉及辐射危害。

需要小心处理、储存和处置放射性物质。

潜在的辐射危害需要记录并报告。

实验室要求

可以在标准实验室进行。

不需要专门的设施或培训。

需要专门的实验室设施来处理放射性物质。

需要专门的区域和对人员进行专门的培训。

成本和便利性

一般成本较低。

没有针对材料储存或处理的具体安排。

由于使用放射性同位素而导致成本较高。

需要对放射性物质的处理、储存和处置进行细致的规划。

敏感度

灵敏度高,但一般比RIA灵敏度低。

ELISA 更灵敏。

监管和安全问题

除了标准实验室安全之外,没有特定的监管问题。

由于使用放射性物质而产生严格的监管和安全问题。

同位素的半衰期较短,限制了它的应用。

  酶联免疫吸附试验和荧光免疫分析

酶联免疫吸附实验

荧光免疫分析

基本原理

使用酶联抗体。

检测基于酶-底物反应的颜色变化或光发射。

使用附着于抗体的荧光标签。

检测基于对抗原抗体复合物发出的荧光强度的测量。

检测机制

测量颜色变化或光发射。

测量荧光强度。

敏感度

灵敏度高,但对于极低浓度,灵敏度一般低于荧光免疫分析法。

灵敏度高,适合检测低浓度的抗原。

应用

广泛应用于临床诊断和研究。

适用于检测和量化各种生物液体和组织中的抗原。

适用于需要高灵敏度的应用。

常用于测量低抗原浓度的研究。

易于使用

使用微孔板读数仪等标准实验室设备进行设置更加简单。

需要能够检测荧光的设备。


酶联免疫吸附试验和化学发光免疫分析

酶联免疫吸附试验

化学发光免疫分析

基本原理

使用酶联抗体。

检测基于酶-底物反应的颜色变化或光发射。

使用从激发态返回基态时发光的分子。

碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶等酶催化与底物(例如鲁米诺)的反应,产生光。

检测机制

测量颜色变化或光发射。

测量光发射。

敏感性和特异性

敏感性和特异性较高,但一般低于CLIA

ELISA 相比,灵敏度和特异性更高。

在检测 SARS-CoV-2 等疾病的抗体时显示出更高的灵敏度(92.3% 97.8% 对比 ELISA 75.0% 84.3%)。

应用

用于检测和定量各种疾病的抗原和抗体,如 SARS-CoV-2HIVHCVHBV、肺炎支原体、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋体等。

易于使用

提供快速的结果。

需要专门的设备来测量光发射。

使用微孔板读数仪等标准实验室设备进行设置更加简单。

CLIA 相比更耗时。

成本效益

更具成本效益,适合日常使用。

由于需要专门的设备和试剂,因此通常价格更昂贵。

检测范围

测量光密度,其范围可能更加有限。

测量相对光单位,提供更广泛的检测范围。

酶联免疫吸附试验与蛋白质印迹法

酶联免疫吸附实验

蛋白质印迹法

基本原理

使用光密度测量抗原抗体反应。

由于其简单性、速度和适合高通量实验室而受到青睐。

使用96孔板,所需样品量较少。

使用标准曲线量化抗原浓度。

更加复杂,更加耗时。

  需要仔细加载样品,考虑膜和信号饱和度,并使用内部控制进行标准化。

  具有高特异性并能检测蛋白质的大小和纯度。

  能够利用荧光标记抗体进行多重检测。

易于使用

操作简单,适合大规模测试。

复杂且需要更多时间和专业知识。

涉及电泳、转移到膜和抗体检测等多个步骤。

敏感性和特异性

对检测和定量抗原具有高灵敏度和良好的特异性。

特异性高,能够确认特定蛋白质的存在和纯度。

可以检测蛋白质的大小,提供有关目标的额外信息。

应用

广泛应用于临床诊断和研究。

非常适合高通量筛选和常规检测。

在需要详细蛋白质分析的研究和临床环境中非常有价值。

用于确认特定目标并分析蛋白质的大小和纯度。

检测和量化

依赖于光密度测量。

使用标准曲线进行精确的浓度测定。

可以实现蛋白质带的可视化,提供有关蛋白质大小的信息。

可以使用内部控制进行标准化以确保结果的准确性。

综合上述,相信你对免疫测定法检测方法之间区别有所了解认识,ELISA作为免疫测定法的经典代表,因其操作简便、灵敏度高、成本较低等优点而广泛应用于各个领域。然而,随着科技的进步,其他免疫测定法不断涌现,各有优劣。无论是ELISA还是其他免疫测定方法,选择合适的检测方法需要根据具体的实验目的、样本类型、目标物质等因素综合考虑。未来,随着技术的发展,免疫测定法将会更加精准、高效、便捷,为科学研究和疾病诊断提供更加强大的助力。