细胞基本信息
细胞名称 |
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细胞品牌 |
通蔚生物 |
种属来源 |
人 |
组织来源 |
人胰腺/导管 |
生长特性 |
贴壁生长 |
细胞形态 |
上皮细胞样 |
细胞规格 |
1×10⁶cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
培养基 |
90% DMEM+10% FBS+PS |
培养条件 |
气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ |
药物备注 |
培养瓶中的培养基是不含药物的,待细胞状态良好,稳定生长时,可以用含加含40nM的吉西他滨药物培养基来培养,期间若有少部分细胞悬浮起来,属于正常情况,通过换液去掉即可。待细胞稳定生长传2代后,使用的吉西他滨药物浓度可提高到60nM,冻存时请不要在培养基中加药物。 |
冻存条件 |
无血清冻存液,液氮储存 |
细胞货期 |
现货,1周左右 |
发货方式 |
复苏发货(T25瓶免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用) |
供应范围 |
仅限于科研实验使用,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
特别说明 |
具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
细胞培养操作
T25瓶 |
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收货处理 |
用75%酒精擦拭细胞瓶表面,放37度培养箱内静置培养2-4h,以便稳定细胞状态 |
传代密度 |
细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 |
传代比例 |
首次传代建议1:2传代,1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
传代方法 |
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b. 加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化2-5 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。 |
注意事项
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1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。 |
冻存管 |
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收货处理 |
收到细胞后,需立即转入液氮冻存或直接复苏 |
传代密度 |
第二天换液并检查细胞密度 |
传代比例 |
一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶 |
传代方法 |
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜)第二天换液并检查细胞密度。 |
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1.收货时若发现干冰化完,检查冻存管是否融化,若已融化需直接离心细胞接种观察,若未融化可以将细胞按正常步骤保存。 2.为保证细胞的高存活率,收到产品后,请立即解冻复苏细胞。 |
细胞冻存操作
冻存液配方 |
无血清冻存液,液氮储存 |
细胞密度 |
待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例 |
冻存方法 |
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
注意事项 |
冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
售后服务
细胞予 |
1.细胞运输中遭遇的各种问题,细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等,重发。 |
2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发。 |
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3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发。 |
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4.常温发货的细胞静置2小时后,干冰冻存发货细胞复苏2天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发。 |
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5.常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后,出现污染,经核实后,重发。 |
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6.细胞活性问题,请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发。 |
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细胞不予 |
1.客户操作造成细胞污染,不重发。 |
2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发。 |
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3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发。 |
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4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片,不重发。 |
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5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发。 |
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6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发。 |
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特别说明 |
上海通蔚生物客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打免费服务电话 : 021-54845833 ,我们随时给予实验中的免费解答。 |