常见ELISA花板原因及排除方法

不知道你是否听说过“花板”现象，近期上海通蔚收到一些科研小伙伴们遇到的“花板”问题。所谓“花板”就是空白、阴阳性对照及室内质控孔结果正常，而标本孔的OD值却偏高。

“花板”出现会影响实验结果正确的判读，对科研工作带来一定影响。为了避免花板现象发生，上海通蔚生物为大家整理关于“花板”现象具体分析及解决办法。

1、样品原因

待测血清中混有红细胞或纤维蛋白原。这两种物质容易沉淀或者附着在聚乙烯孔内，不易洗净。

样品中存在某些共有的物质。这些物质会非特异性吸附在固相载体上，在实验中未被去除，导致标本孔OD值偏高。

血红蛋白中的血红素基团。具有类过氧化物的活性，易在孵育过程吸附固相，与底物反应显色，造成假阳性。

解决办法：

离心处理。在样本制备过程可以加大离心速度，尽量延长时间，使血红细胞和纤维蛋白充分沉淀，让血细胞和血清彻底分离出来。详细了解样品处理，可以参考此篇内容《ELISA样本如何处理、收集、保存》

避免溶血和凝血。样品应无溶血、无凝血、足量。血液标本应置于室温1-2小时，使血液凝固收缩，然后离心检测或让血液过夜后检测。

2、洗涤问题

洗涤不充分。聚苯乙烯塑料对蛋白质吸附性较强，需要通过洗涤清除非特异性吸附的干扰物质。增加洗涤次数和浸泡时间可以减轻和避免“花板”现象发生。

洗涤方法不当。手工洗板时液体溢出或者孔与孔之间的液体溢出，连成整体页面后产生“花板”。使用洗板机同时，针口有纤维蛋白或异物产生拖带现象，导致“花板”。

洗涤温度。洗液温度过低时容易出现“花板”问题，尤其是在冬天。洗液应注满孔，孔壁洗涤不干净也易造成“花板”现象。

解决办法：

增加洗涤次数和浸泡时间：可以进一步减轻或避免对实验结果的影响。

注意洗板方法：避免液体被溅出或孔与孔之间液体溢出，使用洗板机时应防止针口有纤维蛋白或异物。

3.孵育问题

孵育时间过长：增加了固相载体吸附非特异性蛋白的可能性，导致“花板”。

温育条件不当：温箱调温器异常或孵育时反复打开温箱门，降低温箱温度，造成孵育反应不充分，导致假阳性或假阴性结果。

解决办法：

控制孵育时间和温度：严格控制孵育时间，标本较多时可分批操作。温箱温度应保持稳定，避免反复打开温箱门。

上述从样品、洗涤和孵育等方面为大家介绍了出现“花板”现象原因及解决方法。细节决定成败，在进行ELISA实验流程要严格遵循说明书，把控实验流程。