ELISA实验弱阳性，背景高......罪魁祸首可能是“气泡”

  在进行ELISA实验，酶标板孔内气泡导致孔内的溶液不能与孔壁接触，使孔内反应不一。那么，气泡对ELISA实验会产生什么样的影响呢？下文上海通蔚生物为您详细介绍因素及对应的办法。

  目录

  1、认识ELISA原理

  2、气泡干扰因素及办法补救

  ELISA原理

  在进行ELISA实验，通常会在酶标板包被抗原/抗体使其发生特异性反应，然后通过酶标抗体和底物显色。在实验过程，还要对其进行封闭，通过封闭减少外源物质特异性结合。如果孔内一旦有气泡，会导致抗原/抗体结合受到影响，从而影响实验的可靠性；其次封闭不充分，容易产生假阳性等问题。

  气泡干扰因素

  了解气泡干扰因素对实验是非常重要的步骤，所谓“知己知彼百战百胜”。通常气泡干扰因素如下：

  1、干扰抗原/抗体结合

  抗原/抗体结合是ELISA实验比较关键环节，只要结合在一起，我们才能有效检测出样本中的有效成分。在加样时产生气泡可能会导致抗原、抗体溶液不能均匀的分布在酶标板孔内，从而影响抗原和抗体的有效结合。从而导致检测信号减弱或者出现假阳性或弱阳性结果。

  2、影响孔内反应均匀性

  酶标板的主要成分是聚苯乙烯，具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫活性。如果孔内产生气泡，气泡影响了溶液的整体均匀性，从而影响抗原抗体间的有效混合和反应，导致孔内反应不均一，影响最终的显色反应，可能使吸光度值不准确，增加实验的变异性。

  3、包被和封闭问题

  对于部分ELISA类型实验，如间接ELISA/夹心ELISA法通常会采用包被和封闭。包被使抗体/抗原固定在酶标板，为下一步封闭做准备。而气泡会导致包被抗体和封闭蛋白不均匀，减少实际包被量，造成弱阳性。同时，气泡会造成未结合的位点增多，从而增加背景信号，造成非特异性结合，提高本底，从而可能产生假阳性结果。

  4、读数偏差

  ELISA实验最后一步往往会需要进行读数，气泡在孔中或在酶标板表面可能会在读取吸光度时造成光路的异常散射或遮挡，影响读数的准确性，尤其是在使用酶标仪进行光吸收测量时，可能会得到错误的吸光度值。

  上述通蔚生物为大家总结ELISA实验中产生的气泡对ELISA实验造成的影响，那么如何补救呢？

  首先，我们要知道气泡产生的原因，我这里给大家总结比较常见的原因：

  1、操作不当。在适应微量移液器进行加样时，有时候速度过快和过猛都会导致气泡产生。加样时尽量靠近孔底，用力均匀，不要用力过猛。

  2、实验器材问题。微量移液器精度不足或者枪头质量不佳，可能导致液体在转移过程中产生气泡，同时不合适的枪头密封性差也会引入气泡。微量移液器定期进行校验和维护，确保每次转移的体积精确，减少气泡生成的机会。

  3、洗涤过程。洗涤时一定要加满孔，气泡会浮上来最终被驱除。手动洗板一定要吸干水分并用力拍干。

  通过上述介绍，气泡对ELISA实验产生的影响是很大的，因此，科研人员严格按照实验要求进行，避免气泡产生，影响到最终实验的结果。