酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种免疫测定技术。ELISA在免疫测定技术中使用较为广泛，操作简单，用于对附着在固体表面上的抗体或抗原进行定性和定量分析。酶将酶标记抗体固定在96孔或384孔聚苯乙烯板的固体表面上。与抗原结合后，添加底物以测量与原始样品中存在的抗原量成比例的颜色变化/光信号。ELISA实验是最灵敏的免疫分析方法之一，广泛应用于各种研究和行业，包括环境、食品安全、制药和疾病生物标志物诊断。
根据ELISA实验原理，ELISA根据类型分为直接ELISA法、间接ELISA法、竞争ELISA法和夹心ELISA法等。每种类型都有各自的优缺点，因此要根据自己的实验来选择合适的ELISA类型。
直接ELISA法
直接ELISA法原理将抗原固定在板上，然后用酶标抗体直检测抗原。直接ELISA只使用一种酶标记的抗体，并且步骤简单，速度较快。它主要用于抗原的定性/定量检测。由于需要制备针对不同抗原的酶标抗体，成本相对较高，而且灵敏度通常低于间接ELISA。它并不适用于抗体筛选和表位作图等需要更多信息的应用。
间接ELISA法
间接ELISA法原理将抗原固定在板上，相比直接ELISA法多出一个步骤，须加入待检测抗体特异性结合。随后加入酶标二抗检测并用底物显色。
与直接ELISA法相比较，间接ELISA法二抗可以增强信号，提供更高的灵敏度，使用更少的标记抗体，更经济，提供了更大的灵活性。不足的是容易存在交叉反应可能性（酶标二抗直接与抗原结合），可能会增加背景信号，由于间接ELISA法比直接ELISA法多出二抗孵育步骤，实验周期较长。
夹心ELISA法
夹心ELISA法也叫“三明治法。”夹心ELISA原理利用两种针对目标抗原不同表位的抗体进行检测。其中一种抗体称为捕捉抗体，预先包被在固相载体（例如微孔板）上，用于捕获样品中的目标抗原。另一种抗体称为检测抗体，用于检测结合在捕捉抗体上的抗原。夹心ELISA法又分为2种：
1.直接夹心ELISA: 检测抗体上直接标记有酶。捕获抗原后，加入酶标检测抗体，洗涤去除未结合的检测抗体后，加入底物显色，即可测定抗原的量。
2.间接夹心ELISA: 检测抗体不进行标记。捕获抗原后，加入未标记的检测抗体，再加入针对检测抗体的酶标二抗进行检测。洗涤去除未结合的二抗后，加入底物显色，即可测定抗原的量。
竞争ELISA法
最后来说说竞争ELISA法，它可以用来检测抗原或抗体。竞争ELISA用于检测抗原。首先将已知量的抗原包被在固相载体（例如微孔板）上。然后，将待测抗原样品和一定量的酶标抗体同时加入到孔中。待测抗原和酶标抗体竞争结合包被在板上的抗原。待测抗原浓度越高，与酶标抗体竞争结合到板上的抗原越多，因此结合到板上的酶标抗体就越少。孵育一段时间后，洗涤去除未结合的抗体和抗原。最后，加入底物显色。显色强度与待测抗原的浓度成反比。通过与已知浓度的标准品进行比较，可以定量测定待测样品中抗原的含量。
如果是检测抗体，竞争ELISA也用于检测抗体。首先将抗原包被在固相载体上。然后将待测抗体样品和一定量的酶标抗体同时加入孔中。待测抗体和酶标抗体竞争结合包被在板上的抗原。待测抗体浓度越高，与酶标抗体竞争结合到抗原上越多，结合到抗原上的酶标抗体就越少。后续步骤和结果解释与检测抗原的竞争ELISA相同。
竞争ELISA与直接ELISA、间接ELISA和夹心ELISA是并列的ELISA方法。它适用于检测不纯的样品，并且通常具有较好的数据再现性。竞争ELISA的灵敏度和特异性取决于所用抗体的质量和实验条件。夹心ELISA常用于检测大分子蛋白质，通常具有较高的灵敏度和特异性。各种ELISA方法各有优缺点，需要根据具体的实验需求选择合适的ELISA类型。
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