新手速看！ELISA实验常见6类问题解答！

  Elisa技术成为现今实验室不可或缺一部分，它具有灵敏度高、操作简单和安全备受青睐。即使操作简单，但是ELISA属于较为专业的技术，在操作中也难免会出错。上海通蔚结合多年实验室经验为大家总结在ELISA实验中常见问题，了解这些问题可以在实验中少走弯路，提高实验效率，尤其是对于新手。

  1、ELISA实验耗时多久？

  Elisa耗时多久没有明确定义，往往和实验类型、所用试剂盒及操作方法有关。例如：双抗体夹心法需3.5-4小时不等，而竞争法则需要2-2.5小时不等。大家在选购试剂盒时候顺便可以咨询商家，了解试剂盒耗时情况。相关阅读：《elisa试剂盒有类型》

  2、血清样本应如何处理？

  采集全血样本后，迅速将其转移到带盖或盖子的试管中——这将防止在离心过程中传染性颗粒蒸发和气溶胶化。让样本在室温下凝结90分钟，以完全形成凝块。不要让样本在4摄氏度下凝结，因为这可能会导致纤维蛋白形成。在室温下凝结90分钟后，在离心之前，用木制涂抹棒沿着试管内壁滑动，以破坏凝块对试管壁的粘附。在室温下以2000Xg的速度离心样本15分钟。（要将2000Xg转换为rpm，请参阅特定离心机的操作手册）。

  离心后，取出血清并将其放入聚丙烯微量离心管中。请勿将样品储存/运输在玻璃管中。在玻璃管上清楚地贴上识别信息标签。

  3、血浆样本处理步骤是什么？

  采集全血样本后，迅速将其转移到带有抗凝剂和盖子的试管中——这将防止在离心过程中传染性颗粒蒸发和气溶胶化。倒置试管，使样本与抗凝剂充分混合。在室温下以2000Xg的速度离心样本15分钟。（要将2000Xg转换为rpm，请参阅特定离心机的操作手册）。

  离心后，取出血浆并将其放入聚丙烯微量离心管中。尽量小心，不要将红细胞与血浆一起转移。请勿将样品储存/运输在玻璃管中。在玻璃管上清楚地贴上识别信息标签。

  4、组织样本应如何处理？

  将组织匀浆放入PBS（不含洗涤剂或EDTA）中。使用机械匀浆器后，对匀浆进行超声处理60秒，以确保细胞破碎。离心组织匀浆以去除细胞碎片。

  离心后，取出组织匀浆上清液，放入聚丙烯微量离心管中。请勿将样品储存/运输在玻璃管中。在玻璃管上清晰地贴上识别信息标签。

  5、为何部分试剂盒采用竞争ELISA法？

  竞争法ELISA优势适用于检测小分子抗原或半抗原。夹心法因缺乏足够的位点进行双抗体夹心检测，所以会选择竞争法ELISA。其检测原理为样本抗原与固相抗原竞争抗体结合位点，样本抗原越多，固相抗体结合越少，显色越浅，既显色与样本抗原浓度成反比。

  6、推荐哪款软件来处理ELISA数据？

  数据分析用的较多是CurveExper，CurveExpert软件是处理ELISA数据标准曲线的优选工具。相关阅读：《elisa试剂盒如何定量蛋白浓度》

  上述是通蔚为初学者总结的一些ELISA常见的问题，这是我们在与客户沟通中反馈较多的问题，整理出来，希望对大家实验有所帮助！如果您对实验问题还有其它疑问，欢迎指出，我们会竭尽全力为您解答！祝您实验愉快！