Elisa试剂盒故障排除

常见问题

• 使用不匹配的吸头和移液器。
• 不戴手套直接处理吸头。
• 多通道移液器吸头连接不均匀。

解决方案

• 务必使用移液器制造商推荐的吸头，尤其是对于小容量移液器。
• 处理吸头时务必佩戴塑料手套以防止污染。

减少错误

• 确保所有吸头均牢固地安装在多通道移液器上。
• 目视检查体积以尽量减少移液错误。
• 彻底清洗后才能回收吸头，并及时丢弃任何损坏的吸头，尤其是与酶结合物一起使用的吸头。

熟练使用

• 适当的移液技术培训对于保持 ELISA 检测的准确性和一致性至关重要，从而获得可靠的结果。

强烈或长时间的结合反应

• 确保按照说明书的稀释度使用结合物，并用终止缓冲液及时终止反应。

过旧的底物或终止溶液

• 使用新鲜的底物和终止液。终止液应清澈，而不是黄色。

反应未停止

• 停止反应以防止继续显色。

延迟读板

• 加入终止液后立即读板，以避免进一步显色。

受污染的玻璃器皿或塑料

• 使用干净、消毒过的玻璃器皿和新鲜的塑料以防止污染。

孵化温度不正确

• 在正确的温度下进行孵化，并验证孵化器是否正确设置并正常运行。

非特异性抗体结合

• 包括使用合适封闭缓冲液的封闭步骤，例如来自与二抗相同物种的 5-10% 血清或牛血清。确保孔经过预处理以防止非特异性附着。

清洗或阻塞不充分

• 增加洗涤次数和持续时间。使用 BSA、酪蛋白或明胶等蛋白质阻断剂来防止非特异性结合。在洗涤缓冲液中添加 Tween-20 等洗涤剂。

高抗体浓度

• 降低一抗或二抗的浓度。如有必要，进行滴定。

底物溶液的过早制备

• 将底物溶液立即混合，然后加入到板中。

受污染的储液器、板密封剂、移液器吸头或缓冲液

• 每一步均使用干净的器皿并准备新鲜缓冲液，以避免 HRP 污染。

试剂处理

• 按按照说明书以正确的顺序添加试剂。
• 严格按照试剂说明书的要求进行稀释并根据需要重复实验。

抗体浓度

• 如果抗体浓度太低，则增加一抗或二抗浓度。
• 为获得更佳效果，请在 4°C 下孵育过夜。考虑使用抗体浓缩试剂盒。

抗体相容性

• 确保一抗和二抗兼容且物种匹配。
• 对于粘附性较差的情况，请使用经 ELISA 验证的板并将涂层时间延长至 4°C 过夜。

夹心 ELISA

• 确认捕获和检测抗体针对不同的表位。
• 如果需要，请使用不同的抗体对或考虑其他 ELISA 类型。

标准与样品

• 确保标准品正确制备。如果标准品过期或降解，请使用新的小瓶。
• 如果样本不在可检测范围内，则进行连续稀释并加入样本以检查是否存在干扰。

缓冲区注意事项

• 确保缓冲液不含叠氮化物或充分清洗以避免抑制 HRP 活性。

确定问题

• 样本中可能不含有分析物，或者分析物的含量低于可检测水平。
• 分析物浓度可能高于最高标准点。

低分析物浓度的解决方案

• 使用更高的样本量来提高检测效果。
• 寻求适合的协议修改的建议。

高分析物浓度的解决方案

• 稀释样品并重新分析，以使其处于检测的范围内。