告别 PCR 扩增失败！5个技巧助你成功

  聚合酶联式反应（PCR）是分子生物学实验室中扩增特定DNA片断工具。然而，在实际工作中有可能无法获得扩增，这样会影响实验进展及效率。以下是通蔚为大家整理了解决PCR扩增问题的办法。

  使用阳性对照进行测试

  确保PCR系统正常运行：使用阳性对照检查PCR系统是否正常至关重要。如果阳性对照失败，则可能是试剂或热循环仪存在问题。

  污染

  交叉污染：确保您使用的设备和试剂没有受到污染。外来的DNA的存在可能会干扰PCR.

  抑制剂污染：部分样品可能含有PCR抑制剂，盐或干扰反应试剂。使用适当的纯化方法去除这些抑制剂。

  检查试剂

  Taq聚合酶质量：Taq聚合酶是PCR中关键酶之一。如果这些酶失活或降解，它将无法扩增DNA。确保其处于良好的状态并已妥善保存。

  缓冲液和dNTP：缓冲液和DNTP（DNA合成所需的核苷酸）必须具有适当的浓度。如果存储不当或受到污染，则影响扩增。

  调整热循环仪条件

  温度循环：如果变性、退火和延伸温度未得到充分优化，则可能无法进行扩增。确保合适的温度适合你的实验条件非常重要的。

  循环次数：PCR循环次数不足会阻碍扩增，尤其是在DNA浓度较低的情况下，尝试增加循环次数。

  检查引物

  引物设计：如果引物设计不当，他们可能无法与目标序列结合。检查引物特异性和与要扩增的DNA序列的互补性。

  交叉条件：退火的温度对于引物结合至关重要。如果温度过高或过低，引物将无法正确结合。检查引物的最佳条件。

  验证DNA质量和浓度

  DNA降解：如果样本中含有降解的DNA，PCR将无法正常工作。确保DNA完整无损且无污染。在凝胶上进行DNA电泳或测量吸光度260/280通常会有所帮助。

  DNA浓度：DNA浓度过低会阻碍扩增。使用分光光度计或定量方法确保DNA浓度正确。

  上述是排查PCR无法扩增的几种办法，了解这些办法，不管现在还是未来有助于提高PCR实验的进展和效率。希望上述内容对您有个指导作用，如果还有什么疑问，欢迎前来咨询了解。