原代细胞培养有哪些步骤？一文盘点原代细胞培养4大步骤

  原代细胞是从组织机体中分离后并且在体外首次培养的细胞，在体外特定的培养条件下进行生长和繁殖，当细胞增值到一定密度（通常在70-90%汇合度）。为了维持细胞生长和状态活力，需要将细胞转移到含有新鲜生长的培养基新容器中进行传代培养，也称作继代培养。相关阅读：《什么是原代细胞》

  原代细胞培养步骤

  1、组织收集和处理

  在无菌条件下，从动物或人体组织分离样本。在收集和处理样本可以采用消化酶、机械切割或抗体磁珠等方法，将组织分成单个细胞。组织分散成单个细胞后，需要进行洗涤、过滤（例如使用细胞筛）等步骤去除组织碎片和酶。

  2、细胞分离

  根据目标细胞的特性，选择合适的细胞分离方法。常用的方法包括密度梯度离心、荧光激活细胞分选(FACS)、磁性激活细胞分选(MACS)等。例如，可以使用密度梯度离心法根据细胞密度的差异分离不同类型的细胞。筛选、沉淀和离心等步骤通常作为这些方法的辅助步骤，用于去除杂质、收集细胞或更换缓冲液等。

  3、培养基的选择和准备

  根据分离出的细胞类型和实验目的，选择合适的培养基。不同的细胞类型对培养基的营养成分、生长因子和其他添加剂的需求不同。查阅文献或参考ATCC等细胞库的建议，选择适合目标细胞的培养基配方。常用的基础培养基包括DMEM、RPMI-1640、Ham'sF-12等，但通常需要根据具体细胞类型进行调整。

  4、细胞培养和传代

  接下来对细胞进行培养和传代。将分离纯化后的细胞重悬于到合适的培养基中，然后接种到预先用细胞外基质（例如胶原蛋白、纤连蛋白、明胶等）包被的培养皿或培养瓶中，提供适当的温度、湿度和CO2浓度等条件。原代细胞通常生长较慢且有限，当细胞达到一定汇合度（通常为70-90%）时，需要进行传代。

  原代细胞培养注意事项

  1、保持无菌条件

  细胞培养需要在无菌环境下进行，以防止细胞被细菌和真菌污染。在进行原代细胞培养之前，必须确保实验环境和所操作工具、培养皿都处于严格的无菌状态。使用消毒剂清洁操作区域，并穿戴合适个人防护设备，如穿戴无菌手套等。

  2、选择合适的培养基

  根据细胞类型不同选择合适的培养基，查阅文献或参考ATCC等细胞库的建议，选择适合目标细胞的培养基配方。同时也要确保培养基和补充物质配方适合目标细胞类型，并检查过期日期和存储条件。

  3、细胞密度控制

  细胞密度对细胞生长和功能有重要影响。细胞密度过高会导致细胞过度接触和竞争，影响细胞生长；细胞密度过低会导致细胞生长缓慢。因此，根据细胞类型和实验要求控制细胞密度，通常通过细胞计数仪或显微镜进行细胞计数。

  4、注意细菌污染

  在细胞培养过程，需要定期检查细胞是否受到细菌、真菌和病毒等污染。可以通过细菌培养、真菌培养和PCR等方法进行检测。如发现细菌和真菌污染，需立即采取措施，例如更换培养器皿，使用抗生素或抗真菌药物等。同时，也要注意实验室清洁和消毒，以预防细胞污染的发生。

  5、实验记录

  准确记录培养细胞的信息，包括来源、处理方法、传代次数及细胞密度等。这些记录对于实验结果的解释和后续研究非常重要。

  上述是对原代细胞培养有哪些步骤进行介绍，仅供参考！细节决定成败，细菌、真菌、支原体、黑胶虫，个个都是细胞杀手，在进行细胞培养之前要了解注意事项，争取把实验一次性做好。