ELISA检测方法详解：竞争法和阻断法的区别

  ELISA全称为酶联免疫吸附测定(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay),是一种在免疫学实验方法中常用的检测技术,广泛应用于医学、生物学、食品安全、环境监测和药物筛选等领域。在ELISA实验类型中又分为直接ELISA、间接ELISA和竞争ELISA等。除此之外，还有个阻断ELISA法，很多人会把阻断ELISA法区别竞争ELISA法，今天，上海通蔚带大家来认识下阻断ELISA法和竞争ELISA法区别。

  ELISA基本原理

ELISA检测是在96酶标板上进行，将待检测样品（抗原或抗体）固定在板上，然后通过特异性抗体与待测样品结合，从而形成酶标复合物。最终通过底物与酶作用，产生可测定的信号。

  竞争ELISA法

  竞争ELISA法关键在于待测样本中的抗原和实验中添加的已知抗原会争夺固相载体上固定抗体的结合位点。竞争ELISA法步骤如下：

  1.将一抗（未标记）与样品抗原一起孵育。

  2.然后将抗体-抗原复合物添加到预先涂有相同抗原的96孔板中。

  3.通过清洗板去除未结合的抗体。（样品中的抗原越多，能够与孔中的抗原结合的抗体就越少，因此存在“竞争”。）

  4.添加对一抗具有特异性并与酶结合的二抗。

  5.添加底物，剩余的酶引发显色或荧光信号。

  6.对于竞争性ELISA，样品抗原浓度越高，最终信号越弱。

  阻断ELISA法

  阻断ELISA法的关键在于通过样品中的抗体阻断已知量的标记抗体与固定抗原的结合。阻断ELISA法步骤如下：

  将已知的抗原被吸附在固相载体（如ELISA微孔板）上，形成一个固定的抗原层。

  加入样品，如果样品中含有与固相载体上抗原特异性结合的抗体，这些抗体将与固相载体上的抗原结合。

  随后加入标记了酶的二抗（通常是与抗原结合的抗体）。如果样品中已有抗体占据了抗原的结合位点，标记抗体将无法有效结合到固相载体上。

  显色与信号检测：通过显色反应测定酶的活性，信号输出的强度与固相载体上结合的标记抗体的量成正比。因此，样品中特异性抗体的量越高，标记抗体的结合就越少，信号输出也越低。信号输出的强度与样品中特异性抗体的量成反比。

  主要区别

  用途

  阻断ELISA法特别适用于检测样品中抗体的存在和浓度，尤其在样品中可能存在干扰性物质或多种抗体的情况下。

  竞争法ELISA通常用于检测小分子物质等，因为这些小分子物质通常只有一个或有限的抗原位点。此外，也可用于检测抗体。

原理：竞争法ELISA中，样品中的抗原或抗体与固定在固相载体上的抗原或抗体竞争结合标记了酶的抗体；而阻断法ELISA中，样品中的抗体会与固相载体上的抗原结合，从而阻断标记了酶的抗体的结合。

上述是通蔚生物为大家介绍竞争和阻断ELISA法之间的区别，具体选择哪种方法要根据实验要检测样本的需要。如果您对ELISA类型还有疑问，欢迎前来咨询通蔚ELISA顾问。通蔚有拥有15年以上的酶联免疫试剂盒生产经验，搭建了ELISA试剂盒开发和成熟抗原-抗体系统的良好平台。