ELISA试剂盒常见问题处理
发布时间：2021-06-11 发布作者：上海通蔚生物
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ELISA试剂盒常见问题处理
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出现问题
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出现问题的原因
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解决办法
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曲 线
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OD值不正常
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试剂盒未回温
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试剂盒回温到25℃
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温度控制不好
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控制正确温度
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孵育时间不准确
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控制孵育时间
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洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加
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洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干
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阳光直射，对着风直接吹
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避风避光
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酶标仪的波长错误
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酶标仪的波长450nm
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抗体的稀释错误
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正确的稀释抗体
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水质问题
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用娃哈哈矿泉水代替
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白 板
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洗涤液配制错误
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正确的配制洗涤液
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少加液体（抗体、酶标记物、A液、B液）
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正确的步骤加液体
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错加液体
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无 梯 度
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标准品也污染
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换标准品点板
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OD值不正常
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控制温度时间在做一次
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人为点板
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/
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线 性 不 好
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OD值不正常
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控制温度时间在做一次
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人为点板
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/
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回 收 率
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空白管阳性高
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样本本身就是阳性样本
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换阴性样本做回收率
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空白管在实验中被污染
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实验中防止交叉污染
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水质原因
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用娃哈哈矿泉水代替
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偏 高
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添加量不准确
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精准的添加量
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添加浓度不适合
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添加合适的浓度
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取液吹干量多
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准确的取液吹干
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取到其它相层液体
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取需用相吹干
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复溶液未稀释或加入量少
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正确的稀释复溶液
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偏 低
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添加量不准确
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精准的添加量
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添加浓度不适合
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添加合适的浓度
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取液吹干量少
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准确的取液吹干
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复溶液稀释错误或加入量多
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正确的稀释复溶液
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假阴、阳性
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水质原因
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点复溶液验证
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用娃哈哈矿泉水代替
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实验操作原因
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吸取到其它相吹干
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准确的取液吹干
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离心不彻底
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延长离心时间
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样本的污染
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更换样本
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乳化未处理完全
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温浴（70℃）处理乳化现象
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仪器试剂原因
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离心管未清洗干净
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正确的洗涤器具
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有机溶剂的影响
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做试剂空白看影响结果
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衍生化试剂原因（长时间衍生化试剂变质）
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更换衍生化试剂
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与曲线好坏相关
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保证曲线的正常
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金标检测（T）线颜色较浅
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尿液pH偏碱性
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用0.01M HCl调节尿液pH值到7.0左右。
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尿样滴加过多
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重新测定，尿样按照说明书，控制在2滴
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尿液过于混浊
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将尿液离心后，取上清液重新测定
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金标质控（C）线不出现
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检测卡由于高温、受潮等原因失效
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尿样需要重新检测。
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过了有效期失效。
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该批号的金标应丢弃处理，尿液需要重新检测
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操作过程中检测卡没有平放，导致液体样品直接冲过检测区
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尿样需要重新检测，且检测卡平放于桌面上再加样。
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尿液样品中含有较高的抑制或者干扰抗原抗体反应的物质（比如明矾、小苏打、氧化剂、肌酐等）
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该尿液的检测结果无效
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金标卡上在除了T和C线之外的其他地方出线
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金标卡上的划痕；胶体金在跑板过程中没有完全跑干净而遗留在卡上的痕迹；
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该检测卡结果不可信，尿液需要重新检测。
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实验重复性不好
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操作人员的不一致，取样的不一致，样本数量的多少，加样时间的长短，洗涤条件不一致，加样量不一致
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尽量保持的实验一致性
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分析软件的使用
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不能设置和保存
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正确的设置和保存
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如何判断曲线的好坏和分析结果
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正确的判断曲线的好坏和分析结果
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