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021-54845833/15800441009
红斑丹毒丝菌(猪丹毒杆菌)PCR试剂盒
编号
成分
规格
试剂一
PCR MagicMix 3.0
1 mL（红盖）
试剂二
超纯水
1 mL（亮黄色）
试剂三
红斑丹毒丝菌（猪丹毒杆菌）PCR 引物混合液
100 μL（白盖）
试剂四
红斑丹毒丝菌（猪丹毒杆菌）PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）
50 μL（黄盖）
试剂五
使用手册
1 份
产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增红斑丹毒丝菌（猪丹毒杆菌），与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品 RNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 红斑丹毒丝菌（猪丹毒杆菌）PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：
成份
N+2 个样品管
PCR 阴性对照
PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0
各 20μL
20μL
20μL
红斑丹毒丝菌(猪丹毒杆菌)PCR 引物混合液
各2μL
2μL
2μL
N+2个样品DNA模板
各18μL
--
--
PCR 阴性对照（水）
--
18μL
--
PCR 阳性对照红斑丹毒丝菌(猪丹毒杆菌)PCR阳性对照1000倍稀释液）
--
--
18μL
4. 按下表设置 PCR 反应：
|
过程 |
温度 |
时间 |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
|
PCR 反应35个循环 |
95℃ |
30 sec |
|
55℃ |
30 sec |
|
|
72℃ |
40 sec |
|
|
最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
四、特别提示：
本公司的所有产品，仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
