【通蔚生物】：亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase, LAP)测定意义

通蔚生物亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase, LAP)测定意义

注 意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
LAP 是一类能水解肽链 N-末端为亮氨酸的酶，广泛存在于肝、肾、胰等组织中，尤其以肝脏中含量最为丰富。各类肝病患者因肝细胞损伤，血清 LAP 的活性均有不同程度的升高，因此，血清 LAP 活性的检测能从不同侧面反映各种肝病的发生和发展。
测定原理：
LAP 分解 L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在 405nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算 LAP 活性。
自备用品：
酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(104个)：提取液体积(mL)为 1000~5000：1 的比例(建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL 提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次)；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰
上待测。
组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清(浆)样品：直接检测。
LAP 测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm，蒸馏水调零。
2、 将试剂二转移至试剂一中充分溶解(如较难溶解，可 50℃水浴加热约 30min 促进溶解)；在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 50μL 样本和 150μL 试剂一，混匀后立即记录 405nm 处初始吸光值A1 和 2min 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
注意事项：若 ΔA 大于 0.5，需将酶液用提取液稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。使 A2-A1 小于 0.5，
上海通蔚实业有限公司是一家科研和销售亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase, LAP)科学试剂产品，领域涵盖化学、分析化学、生命科学和材料科学等基础创新领域，助力客户的研究计划。公司产品有ELISA试剂盒、细胞培养、金标检测试剂盒、食品检测试剂盒、分子生物学试剂盒、胎牛血清、科研抗体、生物耗材等。