【通蔚生物】：流式细胞实验原理讲解

流式细胞周期检测本文将主要以细胞生物学、免疫学和分子生物学为例，介绍流式细胞术在实际中的应用。

细胞周期检测使用饱和量的DNA结合染料对DNA进行染色。在大多数情况下，使用70%乙醇溶液固定细胞，使细胞通透，然后使用染料(PI, 7AAD, DAPI)染色。当然，也可以使用破膜剂对细胞进行处理，直接对活细胞进行周期检测（联科生物周期检测试剂盒就提供了破膜剂）。此外，个别染料可以进入活细胞，在不伤害细胞的情况下染色DNA，比如Hoescht 33342。在细胞周期检测中，以低流速线性放大的方式采集样本，然后使用倍性建模软件进行分析，以确定细胞所处的阶段。RNA流式细胞术将传统流式细胞术和荧光原位杂交(FISH)结合应用，检测RNA表达和蛋白表达。当无法检测目标蛋白表达，但可以检测RNA表达时，这种技术就可以发挥作用。

流式细胞分选

细胞分选利用流式细胞分选仪来分离纯化细胞或颗粒以供进一步分析。基本上，任何具有荧光的细胞或颗粒都可以被分选。细胞可以被分选到96孔板、384孔板、管中和载玻片上。常见的样本有表达荧光蛋白的转染细胞、干细胞、肿瘤浸润淋巴细胞、肿瘤细胞和白细胞群。细胞分选需要考虑的一个主要因素，是对大量细胞进行染色时，增加所需的抗体量。

其他应用绝对细胞计数

绝对细胞计数可用于任何免疫分型研究，该技术利用随样本一起采集的已知浓度的荧光珠对样本进行分析，并将目的细胞群的门控数量与在同一样本中获得的荧光珠数量进行比较，以计算生成单位体积内的细胞数量。
小颗粒检测和分选使用高灵敏度的流式细胞仪，可以检测和分选外泌体和其他亚微米颗粒。细胞外泌体、病毒和其他颗粒的分析在多个领域得到应用，包括癌症生物学、癌症治疗和疫苗开发。随着不断发展，近年来，流式细胞术也开始在吞噬作用分析、多重微珠阵列检测、细胞定量分析等研究中得到应用。
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