【通蔚生物】：小鼠脊髓微血管内皮细胞方法简介及使用方法

通蔚生物小鼠脊髓微血管内皮细胞方法简介及使用方法
方法简介
通蔚生物实验室分离的小鼠脊髓微血管内皮细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶。
质量检测
通蔚生物实验室分离的小鼠脊髓微血管内皮细胞经C D 31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息
包被条件 ：PLL（0. 1m g/ml），明胶（0. 1%）
培 养  基 ：含FBS、EG F、bFG F、IG F、V EG F、H eparin、H ydrocortisone、P enicillin、Streptom ycin等
换液频率 ：每2-3天换液一次
生长特性 ：贴壁
细胞形态 ：内皮细胞样
传代特性 ：可传2-3代
传代比例 ：1:2
消 化  液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培养条件 ：气相：空气，95% 。C O2，5%
小鼠脊髓微血管内皮细胞体外培养周期有限。建议使用通蔚生物配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
使用方法
小鼠脊髓微血管内皮细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈内皮细胞样，在通蔚生物技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代。建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T 25细胞培养瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1）吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS（37℃预热）清洗细胞一次。
2）添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，37℃温浴1min。倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化。
3）用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞，置于37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。
4）待细胞完全贴壁后，培养观察。之后按换液频率更换新鲜的完全培养基（37℃预热）。
3. 复苏操作说明
1. 准备好37度水浴锅，预热至37度。
2. 准备好T25培养瓶，加入10ml完全培养基（培养基量必须大于冻存液10倍体积）。
3. 取出干冰内冻存细胞管，用EP手套包裹冻存管（防止管内进水导致污染），迅速放于水浴锅内，于1min内融化完全。
4. 取出冻存管，酒精喷洒消毒后擦干，置于超净台内。
5. 吸取冻存管内细胞悬液，加入步骤2中准备好的T25培养瓶内，8字缓慢摇匀。
6. 培养瓶放于37度C O 2恒温培养箱内，静置培养24h，更换新鲜换培养基（注意贴壁细胞、悬浮细胞不同换液操作方法）。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验。包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0. 1m g/m l），明胶（0. 1% ），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和通蔚生物技术部沟通。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
上海通蔚生物科技有限公司自成立以来，一向以小鼠脊髓微血管内皮细胞“优异的产品，优惠的报价和交心的服务”得到广阔新老客户的必定和支撑，不断提高自身的专业技术水平和服务质量，为您提供非常好的产品。