PCR 家族新成员：RT-PCR 为何如此重要？

  PCR技术只能扩增DNA，而不能直接扩增RNA，因此，逆转录技术PCR(RT-PCR)诞生，逆转录酶可以将 RNA 逆转录成 cDNA (互补 DNA)，cDNA 与原来的 RNA 序列互补，但它具有 DNA 的稳定性和易于扩增的特性。RT-PCR 是一项强大的工具，它将 PCR 技术的应用范围扩展到了 RNA 分子，为生命科学研究和医学诊断做出了重要贡献。接下来，上海通蔚为大家详细介绍下什么是什么是RT-PCR？和PCR有啥区别？一起来了解下它们概念，来更好的做PCR实验。

  什么是PCR

   PCR（聚合酶链式反应）是一种实验室技术，由KaryMullis在20世纪80年代开发，如今用于从少量DNA产生大量DNA。

    PCR通常是其他过程中使用的步骤，例如DNA测序、病原体检测和凝胶电泳。PCR是一种重要的诊断技术，常用于病毒学、微生物学、寄生虫学、真菌学和牙科等领域。

    聚合酶链式反应(PCR)是一种用于制备DNA特定片段的多个副本的方法。这个过程从少量模板DNA开始，然后通过称为聚合酶的酶进行复制。通过重复加热和冷却循环可以增加复制的数量，这会分离DNA链，以便它们可以再次复制。

    PCR的最终产物是目标DNA序列的大量相同副本。然后该产品可用于进一步分析，例如测序或Southern印迹。PCR还可用于从mRNA模板分子制备cDNA。

图1 PCR扩增示意图

  什么是RT-PCR

  逆转录PCR（RT-PCR）允许使用RNA作为模板。另一个步骤可以检测和扩增RNA。使用逆转录酶将RNA逆转录为互补DNA(cDNA)。RNA模板的质量和纯度对于RT-PCR的成功至关重要。RT-PCR的第一步是合成DNA/RNA杂交体。逆转录酶还具有RNaseH功能，可降解杂交体的RNA部分。然后单链DNA分子通过逆转录酶的DNA依赖性DNA聚合酶活性完成成cDNA。第一链反应的效率会影响扩增过程。从这里开始，使用标准PCR程序来扩增cDNA。通过RT-PCR将RNA转化为cDNA的可能性有很多优点，它主要用于基因表达分析。RNA是单链且非常不稳定，这使得其使用具有挑战性。它通常作为qPCR的第一步，定量生物样品中的RNA转录本。

  RT-PCR和PCR应用

  PCR通常用于DNA检测和分析，例如检测基因突变、DNA序列分析等。

  RT-PCR通常用于检测RNA的表达水平，例如检测基因的转录水平、miRNA的表达等。

  RT-PC和PCR区别

  ①相同点：

  都是基于PCR技术的扩增技术；

  都需要引物和酶等试剂；

  都可以用于检测DNA或RNA序列。

  ②不同点：

  PCR适用于扩增DNA序列；

  RT-PCR适用于扩增RNA序列；

  上述为您介绍了什么是RT-PCR？PCR和PCR-RT区别。了解区别，对于PCR实验应该有个清晰的认识。实验选择PCR和RT-PCR具体要结合实验目标及检测对象，RT-PCR 技术的出现确实打破了传统 PCR 的局限性，使得我们可以研究和分析 RNA，为分子生物学和医学研究打开了新的窗口。也祝您在生物实验更上一层楼。