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021-54845833/15800441009
细胞信息
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细胞名称 |
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细胞品牌 |
通蔚生物 |
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种属来源 |
牛 |
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组织来源 |
脾脏 |
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生长特性 |
悬浮生长 |
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分离方法 |
通过密度梯度离心获得 |
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细胞简介 |
中性粒细胞(neutrophil)是在瑞氏(Wright)染色血涂片中，胞质呈无色或极浅的淡红色，有许多弥散分布的细小的(0.2~0.4微米)浅红或浅紫色的特有颗粒。细胞核呈杆状或2~5分叶状，叶与叶间有细丝相连。中性粒细胞具趋化作用、吞噬作用和杀菌作用。中性粒细胞来源于骨髓，具有分叶形或杆状的核，胞浆内含有大量既不嗜碱也不嗜酸的中性细颗粒。这些颗粒多是溶酶体，内含髓过氧化酶、溶菌酶、碱性磷酸酶和酸性水解酶等丰富的酶类，与细胞的吞噬和消化功能有关。中性粒细胞来源于骨髓的造血干细胞，在骨髓中分化发育后，进入血液或组织。在骨髓、血液和结缔组织的分布数量比是28：1：25，成年人血液中中性粒细胞的数量约占白细胞总数的55%一70%。 |
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细胞鉴定 |
CD11b/Integrin alpha M+、CD15+、CD45+或CD18+免疫荧光染色为阳性，细胞纯度高于90% |
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支原体检测 |
牛脾脏中性粒细胞不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌 |
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细胞规格 |
5x10⁵cells/T25或1mL冻存管 |
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培养基 |
牛脾脏中性粒细胞专用培养基 |
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培养条件 |
气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
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冻存条件 |
无血清冻存液，液氮储存 |
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细胞代数 |
第1代 |
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细胞货期 |
现货 ，1周左右 |
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发货方式 |
复苏发货（免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） |
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供应范围 |
仅限于科研实验使用，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
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特别说明 |
具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
细胞培养操作
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收货处理 |
取出T25细胞培养瓶，用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态，观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h，以稳定细胞状态 |
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细胞复苏 |
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。 |
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传代密度 |
细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 |
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传代比例 |
首次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
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传代方法
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a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 |
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细胞冻存 |
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
注意事项
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重要提醒 |
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。 2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。 3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。 4. 运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 |
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到货须知 |
1. 收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 3. 由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 |
售后服务
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细胞予重发 |
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1. 细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。 |
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2. 收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。 |
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3. 收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。 |
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4. 常温发货细胞静置2小时后，干冰冻存发货细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。 |
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5. 常温发货的细胞静置22小时且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染经核实后，重发。 |
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6. 细胞活性问题在收到产品3天内提出真实实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。 |
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细胞不予重发 |
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1. 客户操作造成细胞污染，不重发。 |
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2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。 |
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3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。 |
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4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。 |
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5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。 |
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6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。 |
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特别说明 |
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上海通蔚生物客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打免费服务电话021-54845833或15800441009，我们随时给予实验中的免费解答。 |
