到货处理
1、收到细胞后,首先观察泡沫箱中干冰是否有剩余,冻存管是否完好,是否有解冻情况,若发现干冰完全汽化或冻存管有解冻现象,请及时拍照并与我们联系。如果细胞签收三天内 未与我们联系,则默认为收货良好。
2、复苏第一管如有活性、状态问题及时与我们联系,会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。
特别说明:未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。
细胞复苏
1、从液氮灌或-80℃冰箱中查找到需要复苏的细胞,水浴锅提前打开预热 37℃。
2、将查找到的冻存细胞在 37℃水浴中迅速摇晃解冻;
3、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的离心管中,1000rpm 离心 5min;
4、弃去上清液,补加 4-6mL 完全培养基后吹匀,接种于 T25 培养瓶中(或 6cm 皿中)。
5、培养过夜,第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代
1、如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
2、贴壁细胞用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次;
3、加 1-2mL 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培养箱中消化 1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后,加5mL 以上含 10%血清的完全培养基终止消化;
4、轻轻吹打细胞,完全脱落后吸出,在 1000RPM 条件下离心 5-8min,弃去上清液;
5、将悬浮细胞和贴壁细胞收集到的细胞沉淀,加 1-2mL 完全培养基吹打混匀;
6、按 5-6mL/瓶补加培养液,将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 培养液的培养皿中或者培养瓶中。
(即 1 个 T25 传代接种至 2~3 个 T25 或者 2~3 个直径为 6cm 的培养皿)
细胞冻存
细胞收集参照传代步骤 1~2;按冻存数量加入无血清冻存液后直接放-80℃冰箱过夜,后续可转入液氮罐中长期保存。
细胞收货后处理
1、收到细胞后,首先观察培养瓶是否完好,若发现培养瓶有破裂,培养基外溢、浑浊等现象,请及时拍照并与我们联系。
2、用 75%酒精对培养瓶表面进行消毒处理,将培养瓶置于细胞培养箱中静置培养 2~4 h,以恢复细胞状态。
3、静置完成后,取出培养瓶,显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存(40×,100×,200×各一张)前三天照片为重要售后依据。如发现细胞异常请及时与我们联系,如果细胞签收三天内未与我们联系,则默认为收货良好。
4、若细胞密度超过 80%,则可以根据提供的细胞培养步骤进行传代或冻存;若细胞密度未达 到80%,收集悬浮细胞,加入 5mL 完全培养基到原瓶中,放入细胞培养箱中继续培养。
细胞予重发
1.细胞运输中遭遇的各种问题,细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等,重发。
2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发。
3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发。
4.常温发货细胞静置2小时后,干冰冻存发货细胞复苏2天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发。
5.常温发货的细胞静置22小时且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后,出现污染经核实后,重发。
6.细胞活性问题在收到产品3天内提出真实实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发。
细胞不予重发
1.客户操作造成细胞污染,不重发。
2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发。
3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发。
4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片,不重发。
5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发。
6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发。