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021-54845833/15800441009
基本信息
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细胞名称 |
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细胞品牌 |
通蔚生物 |
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细胞规格 |
1×10⁶cells/T25培养瓶 |
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细胞英文 |
Ecad231-7细胞 |
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细胞简介 |
E-Cadherin稳定表达 |
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种属来源 |
人 |
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组织来源 |
乳腺 |
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疾病特征 |
乳腺癌 |
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细胞形态 |
上皮细胞样 |
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生长特性 |
贴壁生长 |
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培 养 基 |
RPMI 1640，90% ；FBS，10% |
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生长条件 |
气相：空气，95% ；二氧化碳，5% ; 温度：37℃ |
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传代方法 |
1：2至1：6，每周2次 |
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冻存条件 |
90%完全培养基+10% DMSO，液氮储存 |
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支原体检测 |
阴性 |
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发货方式 |
快递运输(特殊情况的另处理) |
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供应范围 |
仅限于科研实验使用，不得用于其它用途 |
接受后处理
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处理1 |
收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们 |
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处理2 |
请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h |
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处理3 |
弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基 |
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处理4 |
如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司的完全培养基 |
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处理5 |
接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系 |
细胞操作
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复苏细胞 |
将含有1mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
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细胞传代 |
如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养: |
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1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 |
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2. 加 1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 |
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3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 |
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4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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细胞冻存 |
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类: |
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1. 弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 |
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2. 4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。 |
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3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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注意事项 |
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 |
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2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 |
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3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。 |
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4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞汇合度80%左右时正常传代。 |
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5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养，培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。 |
售后服务
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细胞予重发 |
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1. 细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。 |
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2. 收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。 |
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3. 收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。 |
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4. 常温发货细胞静置2小时后，干冰冻存发货细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。 |
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5. 常温发货的细胞静置22小时且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染经核实后，重发。 |
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6. 细胞活性问题在收到产品3天内提出真实实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。 |
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细胞不予重发 |
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1. 客户操作造成细胞污染，不重发。 |
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2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。 |
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3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。 |
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4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。 |
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5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。 |
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6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。 |
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特别说明 |
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上海通蔚生物客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打免费服务电话021-54845833或15800441009，我们随时给予实验中的免费解答。 |
