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021-54845833/15800441009
细胞基本信息
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细胞名称 |
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货 号 |
TW-CC3728 |
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细胞品牌 |
通蔚生物 |
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种属来源 |
人 |
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年龄性别 |
男；43岁 |
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组织来源 |
肺癌：非小细胞肺癌；转移灶：淋巴结 |
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生长特性 |
贴壁生长 |
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细胞形态 |
上皮细胞样 |
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活性检测报告 |
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细胞简介 |
/ |
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puro药筛浓度 |
NCI-H1299-LUC-EGFP细胞puro药筛浓度为1.0 ug/ml，培养过程中可不用再添加puro，如若担心抗性随着传代时间降低，可定期用0.5 ug/ml浓度puro维持 |
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STR位点 |
Amelogenin:X；CSF1PO:12；D13S317:12；D16S539:12,13；D18S51:16；D19S433:14；D21S11:32.2；D2S1338:23,24；D3S1358:17；D5S818:11；D7S820:10；D8S1179:10,13；FGA:20；TH01:6,9.3；TPOX:8；vWA:16,17,18 |
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细胞代数 |
10代以内 |
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生物安全等级 |
1 |
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细胞规格 |
1x10⁶cells/T25培养瓶或者1mL冻存管 |
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培养基 |
90%RPMI-1640+10% FBS+1%PS |
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培养条件 |
气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
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冻存条件 |
无血清冻存液，液氮储存 |
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细胞货期 |
现货，1周左右 |
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发货方式 |
复苏发货（T25瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） |
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供应范围 |
仅限于科研实验使用，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
细胞培养操作
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T25瓶 |
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收货处理 |
观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态 |
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传代密度 |
细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 |
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传代比例 |
首次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
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传代方法 |
a. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗NCI-H1299-LUC-EGFP细胞1-2次。 b. 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有NCI-H1299-LUC-EGFP细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化2-5 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将NCI-H1299-LUC-EGFP细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 |
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注意事项
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1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。 |
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冻存管 |
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收货处理 |
收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏 |
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传代密度 |
第二天换液并检查细胞密度 |
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传代比例 |
一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶 |
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传代方法 |
1.将含有1 mLNCI-H1299-LUC-EGFP细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。 2.在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。 3.将所有NCI-H1299-LUC-EGFP细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜） 4.第二天换液并检查细胞密度。 |
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1.收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存。 2.为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。 |
细胞冻存操作
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冻存液配方 |
无血清冻存液，液氮储存 |
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细胞密度 |
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例 |
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冻存方法 |
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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注意事项 |
冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
售后服务
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细胞予 |
1.细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。 |
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2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。 |
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3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。 |
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4.常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。 |
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5.常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染，经核实后，重发。 |
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6.细胞活性问题，请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。 |
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细胞不予 |
1.客户操作造成细胞污染，不重发。 |
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2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。 |
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3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。 |
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4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。 |
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5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。 |
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6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。 |
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特别说明 |
上海通蔚生物客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打免费服务电话 : 021-54845833 ,我们随时给予实验中的免费解答。 |
