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021-54845833/15800441009
产品及特点：
寨卡病毒(Zika Virus，ZIKV)是一种 RNA 病毒，感染后典型的症状包括急性起病的低热、斑丘疹、关节疼痛（主要累及手、足小关节）、结膜炎，其他症状包括肌痛、头痛、眼眶痛及无力。另外少见的症状包括腹痛、恶心、呕吐、黏膜溃疡和皮肤瘙痒。症状通常较温和，持续不到一周，需要住院治疗的严重病情并不常见，因此快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测寨卡病毒的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 RNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据寨卡病毒高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
规格及成分：
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编号 |
成分 |
规格 |
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试剂一 |
探针法 qRT-PCR 缓冲液 |
500 μL（蓝盖） |
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试剂二 |
探针法 qRT-PCR 酶混合液 |
100 μL（红盖） |
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试剂三 |
荧光 PCR 专用模板稀释液 |
1 mL（黄盖） |
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试剂四 |
寨卡病毒探针法qRT-PCR引物混合液 |
100 μL（白盖） |
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试剂五 |
寨卡病毒 qRT-PCR 探针 |
50 μL（棕色管） |
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试剂六 |
寨卡病毒探针法qRT-PCR阳性对照(1×10E8/μL) |
50 μL（黄盖） |
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使用手册 |
1 份 |
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低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
样品 RNA。
使用方法：
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）：
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备：
7. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
三、Probe qRT-PCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）：
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
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成份 |
样品管N+2个 |
RT-PCR阴性对照管 |
标准曲线样品管2-7管 |
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探针法 qRT-PCR 缓冲液 |
各 10 μL |
10 μL |
各 10 μL |
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探针法 qRT-PCR 酶混合液 |
各 2 μL |
2 μL |
各 2 μL |
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寨卡病毒qRT-PCR 探针 |
各 1 μL |
1 μL |
各 1 μL |
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寨卡病毒探针qRT-PCR引物混合液 |
各 2 μL |
2 μL |
各 2 μL |
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待测样品 RNA 模板 |
各 5 μL |
-- |
-- |
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超纯水 |
-- |
5 μL |
-- |
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第7步所得标准曲线样品稀释液2-7号 |
不加 |
不加 |
各5 μL (2号样到2号管，3号样到3号管) |
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过程 |
温度 |
时间 |
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逆转录 |
50℃ |
30 min |
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预变性 |
94℃ |
10 min |
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qRT-PCR反应35个循环 |
94℃ |
15 sec |
|
60℃ |
1 min，(采集FAM通道的荧光信号) |
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。
五、特别提示：
本公司的所有产品，仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
