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021-54845833/15800441009
Catalogue No : C247
Product Format : a T25 flask
Culture Properties： 半贴壁(贴壁弱，不需要胰酶消化)
Complete Growth Medium : 89%IMDM+10%FBS+1%双抗
Atmosphere : air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application : Cells and cancer research
NOTE : FOR RESEARCH USE ONLY
Operation steps for cell culture
1. 轻轻吹匀细胞，收集悬液1000rpm(150g左右)离心3min，弃上清。
2. 用新的完全培养基重悬细胞，均匀分为几份，接种到新的培养瓶中，并补加足量的完全培养基；（细胞比较依赖细胞密度，细胞传代前及传代后密度不宜过低，过低可能会导致细胞生长缓慢或者死亡。细胞传代前培养基不能完全变黄，不然细胞状态变差会导致传代失败。传代过程吹打细胞应尽量轻柔，不应吹出过多气泡。）。
3. 将细胞放回37度培养箱继续培养。
传代比例 : 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。
Cell cryopreservation
1. 冻存液：92%完全培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择）。
2. 降温步骤：4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。
Tips
1. 细胞经过运输后，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。加5ml PBS重悬细胞，再900-1000rpm(约150g)离心3min，用新鲜的完全培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。
2. 细胞生长不均时，可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。
3. 细胞生长缓慢时，可以选择提高血清浓度培养（最高不超过20%），也可以根据细胞生长状态，选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。
4. 不同细胞贴壁性差异比较大，所以消化时间差别较大，20s-10min均有可能，具体以细胞消化到相互分离但未脱落，并可以轻轻吹下为准，严禁消化到细胞完全漂浮。客户消化过度导致细胞死亡、漂浮、生长缓慢，不提供免费售后服务。
5. 干冰发货均为两支，客户先复苏一支，若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支。若客户同时复苏两支均状态不佳，我方不提供免费售后服务。
6. 细胞状态正常时，应尽快冻存细胞保种，冻存后应随机抽取一支检测冻存效果。我方不对客户冻存细胞导致死亡负责，客户冻存细胞死亡不提供免费售后服务。
Notice
客户收到细胞有任何疑问请及时致电我们，细胞收到后1周内没有任何电话，或其他形式回访，默认为细胞质量没问题，之后出了任何问题不给予免费售后。细胞免费售后只提供一次，若重发后再次培养死亡不再免费补发，细胞收货时已经死亡或密度不足的除外。
