产品简介
产品名称 :大鼠表皮成纤维细胞
产品品牌 :通蔚生物
组织来源 :皮肤组织
产品规格 :5×105cells/T 25细胞培养瓶
细胞简介
大鼠表皮成纤维细胞分离自皮肤组织。皮肤组织来源包括头部、脸部、手、脚、腿、背部、腹部、包皮等体表部位皮肤,可依据需求选用。表皮位于动物皮肤的外层,由胚胎时期外胚层形成,具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构,由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层,即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。成纤维细胞(Fibroblast) 是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。
成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。
30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起。6h后细胞基本贴壁完全,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团。细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
方法简介
通蔚生物实验室分离的大鼠表皮成纤维细胞采用先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×105cells/瓶。
质量检测
通蔚生物实验室分离的大鼠表皮成纤维细胞经Vim entin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息
培 养 基 :含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptom ycin等
换液频率 :每2-3天换液一次
生长特性 :贴壁
细胞形态 :成纤维细胞样
传代特性 :可传5代左右。3代以内状态最佳
传代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白酶
培养条件 :气相 :空气,95% 。C O2,5%
大鼠表皮成纤维细胞体外培养周期有限。建议使用通蔚生物配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
使用方法
大鼠表皮成纤维细胞是一种贴壁细胞,细胞形态呈成纤维细胞样,在通蔚生物技术部标准操作流程下,细胞可传5代左右。3代以内状态最佳。建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T 25细胞培养瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1) 吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min。倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化。
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5m L,置于37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。
4) 待细胞完全贴壁后,培养观察。之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验。包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0. 1m g/m l),明胶(0. 1% ),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和通蔚生物技术部沟通。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。